ЭлБиб

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯКЛОНА RF1 ЯБЛОНИ СОРТА

ФЛОРИНА С

ПОМОЩЬЮ AGROBACTERIUM TUMEFACIENS

Корховой В.И., Бартиш И.В., Левенко Б.А.

Институт садоводства, УААН, г.Киев-27, E-Mail:

Институт физиологии растений и генетики НАНУ, г.Киев-22, ул. Васильковская

31/17,

E-Mail:plant@ifig.freenet.kiev.ua

Получение сортовых растений яблони устойчивых к грибным,

вирусным, бактериальным заболеваниям методами традиционной

селекции требует длительных усилий. Благодаря альтернативным

подходам, а именно методам генетической трансформации, открываются

возможности быстрого создания новых сортов, сохраняющих все ценные

свойства старых, нс обладающих при этом устойчивостью к вредителям

и заболеваниям. В последние годы проводится интенсивная разработка

методов трансформации коммерческих сортов яблони с помощью

Agrobacterium tumefaciens.

Эти результаты показали определенную

сортоспецифичность, в связи с чем возникает необходимость

разрабатывать методы генетической трансформации для конкретных

с о р т о в , кроме то го , со общ е н и я о п о л у ч е н и и гене ти ч е с ки

трансформированных сортовых растений яблони в странах СНГ

немногочисленны. В экспериментах по трансформации использовали

клон RF1 яблони сорта Ф лорина , по л уче н ны й в результате

предварительных экспериментов по адвентивному органогенезу

in vitro

и штамм

A.tumefaciens

А281 pTiBo542/pGV730 с маркерным геном NPTII.

Использовали листовые экспланты с хорошо развитых побегов,

находившихся на среде для размножения (МС; 0,5 мг/л БАП; 0,1 мг/л

ИМК) в течение четырех недель. Кокультивацию с бактерией проводили

в течение 2-3 суток в термостате при 25_5о_0С на твердой среде (соли

1/2 МС; 0,2 мг/л тидиазурона; 0,1 мг/л ИМК) с добавлением смеси

агар:фитогель 3:1,25 г/л. После инкубации экспланты переносили на

селективную среду того же состава с 50 мг/л канамицина и 300 мг/л

клафорана. Инкубировали в темноте на протяжении 3-х недель. В разных

экспериментах в селективных условиях наблюдали каллусогенез у 10-

40% эксплантов, которые продолжали культивировать на среде

аналогичного состава в присутствии 100 мг/л канамицина. В результате

длительного культивирования был отобран регенерант, который

формировал зеленые побеги на среде с 100 мг/л и корни в присутствии

50 мг/л канамицина. Проводится молекулярно-биологический анализ

полученного клона.

2 7 0

Научная электронная библиотека ЦНСХБ