ЭлБиб

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

УСТОЙЧИВОСТЬ К ВТМ ТРАНСГЕННЫХРАСТЕНИЙ ТАБАКА,

ПРОДУЦИРУЮЩИХДВУНИТЕВУЮ РНК

КоростылеваТ.В., ПетроваО.С., АндрееваЭ.Н., ОдинцоваТ.И.,

Смирнов

С.П., ПухальскийВ.А.

Институт общей генетики ши Н.П. Вавилова РАН, 117809 Москва,

ул. Губкина 3. E-Mail:

pukhalsk@vigg.ru

Исследовали функцию двунитевой РНК, как одного из возможных

защитных механизмов растений к вирусной инфекции. В качестве объекта

использовали трансгенные растения

N icotiana tabacum cv. Samsun

со встроенной конструкцией, детерминирующей синтез двунитевой РНК.

Показано стабильное наследование встроенной конструкции во втором

и третьем поколениях. В опыте использовали растения третьего

поколения. Селекцию трансгенных потомков проводили на среде с

канамицином (50 мкг/мл). Укоренившиеся проростки высаживали в почву

и далее инфицировали обычным (vulgare) и вакцинным (АТ-16) штаммами

ВТМ. На ранних стадиях развития инфекции трансгенные растения не

обнаруживают морфологических отличий от контрольных нетрансгенных.

На поздних сроках (1-1.5 месяца) угнетение роста у трансгенных

растений проявлялось в меньшей степени чем у контрольных.

Белки экстрагировали из листовой ткани ацетатным буфером рН6,8

на седьмой день после заражения. Методом SDS-PAGE и двумерного

электрофореза в листьях трансгенных растений было выявлено два новых

белка, отсутствующих в контрольных инфицированных растениях.

Одновременно показано уменьшение накопления белка оболочки как

вакцинного, так и обыкновенного штаммов ВТМ в трансгенных растениях.

Выделение ds-PHK проводили по методу De Paulo (1995) с

использованием 20% SDS и 5М ацетата калия. Обнаружена ds-PHK трех

типов. Молекулы ds-PHK размером 12kb и 8kb присутствуют как в

трансгенных, так и в контрольных растениях, инфицированных обычным

штаммом ВТМ. 0,6kb ds-PHK была выявлена только у трансгенных

растений.

В результате показана защитная функция ds-PHK, однако роль в

ней новых белков и специфических ds-PHK неясна, что требует

дальнейших исследований.

268

Научная электронная библиотека ЦНСХБ