ЭлБиб

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ. СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

РАЗРАБОТКАМЕТОДОВРЕГЕНЕРАЦИИИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ

ТРАНСФОРМАЦИИ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ (BETA

VULGARIS L.)

Захарченко Н.С., Бурьянов Я.И.

Филиал института биоорганической химии им. М.М.Шемякина, Ю .А .

Овчинникова РАН, г. Пущино, Московская оба., 142292, E-Mail:

Растения сахарной свеклы выращивали на безгормональной среде

Мурасиге- Скуга (MS). На питательной среде MS с добавлением

фитогормонов 6- бензиламинопурина (БАП) и гибберелловой кислоты

(M S -1 ) л и с ть я с череш кам и о б р а зо вы вал и ре генеран ты с

эффективностью 30-40% ( в зависимости от сорта). На среде MS с

добавлением фитогормонов БАП и трийодбензойной кислоты из листьев

через 35 дней образовывались каллусы, которые при переносе на среду

MS с БАП( 1,0 мг/л) образовывали дифференцированные побеги. Из

всех регенерантов пяти сортов сахарной свеклы получены нормальные

растения. Генетическую трансформацию сахарной свеклы проводили

методом ко культивирования череш ков с разными штаммами

Agrobacterium tumefaciens.

Трансформация эксплантов сахарной свеклы

штаммом С58, содержащим "неразоруженную" плазмиду С58, или

плазмиду С58/21, содержащую в области Т-ДНК бактериальный ген

метилазы EcoRII, индуцировала образование опухолей. Анализ опухолей,

р а с т ущ и х на бе з горм о н ал ь н ой среде , по ка за л наличие

нопалинсинтазной активности. ДНК, выделенная из опухоли С58,

подвергалась гидролизу рестриктазой EcoRII в большой степени по

сравнению с ДНК из ткани С58/21, но обе ДНК в равной степени

гидролизовались рестриктазой BstN1, узнающей ту же нуклеотидную

последовательность. Эти данные указывают на дополнительную

м одиф и кацию ДНК трансф орм ан тов ДНК- метилазой EcoR II.

Трансформация эксплантов сахарной свеклы агробактериальным

штаммом GV3101 с плазмидой помощником рМР90RK и геном гоЮ на

бинарном векторе рРСV 002 приводила к развитию у трансформантов

корней на среде MS-1, содержащей 50 мг/л канамицина. Показано

наличие неомицинфосфотрансферазной активности в корневых тканях

трансформантов свеклы.

258

Научная электронная библиотека ЦНСХБ