ЭлБиб

254 / 592

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ
ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯАRABIDOPSI ИНОКУЛЯЦИЕЙ
АГРОБАКТЕРИИ INPLANTAКАКАЛЬТЕРНАТИВАМЕТОДА
ТРАНСФОРМАЦИИ IN VITRO
Ежова Т.А., Солдатова О.П., МамановаЛ.Б., Полянская И.П., Климов Е.А.
Биологический факультет, Московский государственныйуниверситет, 119899
Москва, Россия. E-Mail:
С целью выделения инсерционных мутантов Arabidopsis проводили
трансформацию трехнедельных растений с помощью инокуляции в
срезы стеблей суспензии Agrobacterium tumefaciens штамма LBA4404
по методу Chang et al. 1994 (Plant J., 5, 4: 551- 558). В работе
использовали вектор pLD4, сконструированный в ИОГен РАН на основе
бинарного вектора рВ1121 (Галеева и др., 1995. Генетика, 31, 8 :10 85 -
1091). Маркерами для отбора трансформантов служили гены из Т-области
npt11 и uidA, экспрессирующиеся в растениях и обеспечивающие их
устойчивость к канамицину (Km) и активность В-глюкуронидазы (GUS),
соответственно. Семена, собранные с вновь образующихся побегов
инокулированных растений (поколение Т2), высаживали посемейно на
среду с Km (100мг/л) и в почву. Обнаружено, что в 19% семей из 288
проанализированных выщеплялись устойчивые к Km проростки. Частота
Km-устойчивых проростков колебалась от 4 до 72% в разных семьях.
Среди растений Т2 поколения, высаженных в почву, в 8 семьях
обнаружены мутанты с измененной морфологией вегетативных и
генеративных органов, а также растение химерное по хлорофильной
мутации. Лишь для двух мутантов показано наличие GUS-активности.
Все потомки этих мутантов (ТЗ поколение) обладали Km-устойчивостью
и наличием GUS- активности, однако для окончательного доказательства
инсерционной природы этих мутаций необходим анализ совместного
наследования морфологических изменений и маркерных генов.
Высокая частота трансформации и возможность избегать
нежелательных последствий сомаклональной изменчивости позволяет
рассматривать данный метод как удачную альтернативу методу
трансформации растений in vitro.
Исследования выполнены при частичной поддержке гранта РФФИ
и Российского фонда "Приоритетные направления современной генетики"
254
Научная электронная библиотека ЦНСХБ