ЭлБиб

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГАПЛОИДНЫХКЛЕТОК

TRITICUMAESTIVUML.

ДЛЯПОЛУЧЕНИЯТРАНСГЕННЫХРАСТЕНИЙ

Анапияев Б.Б., Блохина О.М., Евдакова Н.А., Каляев А .Б., Заиров С.З.

Институтмолекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина, Республика

Казахстан, г. Алматы, 480012, ул. Досмухамедова 86.

Создание трансгенных растений - широко распространенный метод

получения устойчивых к неблагоприятным факторам среды, а также

вы с о ко п р о д у к т и в н ы х сортов и форм х о зя й с тв е н н о важны х

сельс кохо зяй ственны х растений. Ранее нами были получены

трансгенные растения гексаплоидной пшеницы трансформированные

бинарной векторной системой плазмид агробактерий, где была показана

интеграция чужеродных генов в геном трансформируемого растения

(Капиев., Корниенко и др. 1991,1992). Однако, нам представляется более

интересным и перспективным с теоретической и практической стороны,

использование для генетической трансформации чужеродными генами

гаплоидных клеток, полученных в культуре изолированных микроспор

in vitro. После получения трансгенных растений будут проведены

исследования по выявлению влияния генно- инженерных манипуляций

на фенотип, молекулярно- биохимические показатели, урожайность и

технологические качества зерна. Гаплоидные клетки были получены в

культуре изолированных микроспор на модифицированной нами среде

М5 (1 мг/л 2,4-Д). Генеративные клетки культивировали на стадии

вакуолизированной микроспоры после холодовой предобработки (4-7

С) при 27°С в темноте. По мере появления андроклинные структуры

(эмбриоиды, каллусы, глобулы) были пересажены на модифицированную

среду МС (2 мг/л 2,4-Д или 0,5 мг/л ИУК) и культивировались на свету.

П ол уче н ны е ре генеран ты и с п о л ь зо в а л и для ге не тиче с кой

трансформации. Базальную часть регенерантов помещали на твердую

питательную среду, содержащую соли по MS, витамины, 3% сахарозу,

ацетосерингон (AS) и 2- 4 мг/л 2,4-Д, pH 5,5- 5,7 и культивировали при

25°С 2 суток. Затем инокулировали с суспензией клеток Agrobacterium

и помещали на ту же среду и инкубировали в течении 2 суток, после

чего эти проростки переносили на свежую питательную среду без AS,

но с добавлением антибиотика канамицина в концентрации 50 мг/л и

клафорана 300 мг/л.

2 4 0

Научная электронная библиотека ЦНСХБ