ЭлБиб

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

ИСПОЛЬЗОВАИИЕАНТИСМЫСЛОВЫХРНКДЛЯИНГИБИРОВАНИЯ

ОПУХОЛЕОБРАЗОВАНИЯУРАСТЕНИИ

АлексееваВ.В., РукавцоваЕ.Б., Бурьянов Я.И.

Филиал института биоорганической химии, Пущино. E-Mail

Заражение растений агробактериями приводит к опухоле-

о б р а зо в а н ию . При э том в о п у х о л и п р о и с хо д и т э кспр есси я

агробактериальных генов, в т.ч. генов фитогормонов.

Целью данной работы было получение растений табака с

цитокининовым геном tm r в смысловой и антисмысловой ориентациях.

Известно,что стратегия антисмысловых РНК широко используется

в генной инженерии растений для ингибирования определенных генов.

С целью создания растений, устойчивых к агробактериальному раку,

проведено клонирование гена tmr. В качестве донора гена использовали

плазмиду рИВо542. Ген синтезировали с помощью ПЦР и встраивали в

растительный вектор pRT103, содержащий промотор 35S и сайт

полиаденилирования. Полученную кассету, содержащую ген tm r под

контролем промотора35S, встраивали в бинарный вектор pGA482. Этой

конструкцией трансформировали агробактериальный штамм LBA4404

(pAL.4404). Гибридизация ДНК полученных клонов подтвердила наличие

в них гена tmr. Полученными агробактериями заразили листовые диски

табака и получили побеги на среде с 50 мг/мл канамицина. При

использовании конструкции с геном tm r в смысловой ориентации,

побе гообразование происходило на безгормональной среде.

Полученные растения имели измененный фенотип и не образовывали

корней. Это свидетельствовало об экспрессии гена. Для получения

побегов с геном tm r в антисмысловой ориентации требовалось

добавление гормонов.

Наличие гена tm r в трансгенных растениях показано с помощью

ПЦР.

Планируется заражение трансформированных растений штаммами

агробактерий, содержащими ген tm r в ориентации, противоположной

ориентации встроенного гена.

Предполагается подавление экспрессии агробактериальных генов

фитогормонов в трансгенных растениях с помощью антисмысловых РНК.

Подобная стратегия может иметь значение для защиты растений от

агробактериального рака.

238

Научная электронн я библиотека ЦНСХБ