ЭлБиб

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

ИЗУЧЕНИЕФАКТОРАТОЛЕРАНТНОСТИЭКСПЛАНТОВСАХАРНОЙ

СВЕКЛЫПООТНОШЕНИЮК

A. TUMEFACIENS

ШТ. А281

БогдаевА.Г., КорниенкоА.В.

Всероссийский научно-исследовательский институт сахарной свеклы и сахара.

Рамонь. Россия.

Проводилась агробактериальная трансформация сахарной свеклы

в культуре

in vitro

с использованием штамма А281, несущего бинарную

векторную систему с целевым геном энтомотоксина под конститутивным

промотором . Изучался ряд факторов, влияющих на получение

т р а н с г е н н ы х побегов у трех генотипов сахарной свеклы: сорт

Рамонская-09, инбредные линии 95155,95195. Состав питательной среды

для кокультивации, на основе MS был модифицирован: количество

сахарозы - 10г/л, аскорбиновой кислоты 50 мг/л. В качестве эксплантов

использовались фрагменты черешков листовой пластинки, как

о п тим а л ь н о с о о тв е тс тв ующ и е тр е б о в а н и ям пр ове д е ни я

агробактериальной трансформации.

Повышение эффективности трансформации обеспечивалось

увеличением продолжительности кокультивации до 3-х суток, всвязи с

чем проводилось прямое тестирование образцов сахарной свеклы на

толерантность к высокому титру агробактерий.

Было отмечено,что при длительной (до 20 дней) контаминации

тканей черешков штаммом А281 отмечается слабый отрицательный ответ

в виде отмирания нескольких слоев клеток по периметру тонкого надреза.

Однако, образования некротических очагов у большинства эксплантов

не происходило, что позволяло в дальнейшем проводить индукцию

адвентивно го побе гообразования. Б результате тестирования

полученны х регенерантов на селективны х средах с Km было

установлено: образцы, обладающие резистентностью к К m100,

демонстрировали стабильность проявления данного признака; различия

по уровню резистентности среди образцов также стабильно сохранялись

при всех вариантах тестирования.

Т.о., толерантность к присутствию агробактерий трансфор

мирующего штамма обеспечивала жизнеспособность эксплантов в

период морфогенеза адвентивных побегов, благодаря чему выход

побегов устойчивых к К m100 увеличился с 6% до 15%.

2 4 4

Научная электронная биб иотека ЦНСХБ