33 / 522
МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВЫЯВЛЕНИЯ ИЗОЭНЗИ
МОВ ПЕРОКСИДАЗЫ И ИХ ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ У
ЯЧМЕНЯ
В.П. Нецветаев1,2
Белгородский государственный университет1,
Белгородский научно-исследовательский
институт сельского хозяйства2, Белгород
При использовании для инкубации пероксидаз раствора,
включающего гваякол с перекисью водорода, невозможно зафик
сировать полный изоферментный спектр. Окраска мест локализа
ции фермента в геле при инкубации на пероксидазную активность
исчезает в течение нескольких секунд. Невозможность фиксации
при исследовании данного энзима отмечена и другими авторами
(G. Nielsen and Н.В. Johansen, 1986), использующими для разделе
ния пероксидазы щелочную буферную систему.
При разделении пероксидазы зрелого эндосперма в кислых ус
ловиях (рис. Б) обнаруживаются множественные молекулярные
формы этого фермента. Как видно, данный энзим у ячменя облада
ет большим количеством множественных молекулярных форм, а
данная культура по нему является полиморфной. В процессе рабо
ты с пероксидазой был найден простой способ идентификации и
фиксации на электрофореграммах пероксидазных зон активности.
Суть заключается в сравнении электрофореграмм белков, получае
мых без инкубации и с инкубацией на пероксидазную активность.
В обоих случаях производится обычная фиксация в ТХУ с окра
ской кумаси (бриллиантовый голубой R). Таким образом, удается
восстановить полный спектр пероксидаз (рис. Б) на фоне раство
римых белков зрелого зерна (альбумины+глобулины) (рис. А). Как
видно, сорта ячменя (Betzes, California Mariout, Prato) различаются
по нескольким зонам подвижности, разделяемой в кислых услови
ях зерновой пероксидазы, что свидетельствует о внутривидовом
полиморфизме по данному ферменту.
С целью определения хромосом, критических в отношении ге
нетического контроля этих пероксидаз, были исследованы допол
ненные пшенично-ячменные линии и их исходные родители. До
полненные линии созданы на основе сорта пшеницы Chinese spring
31
Научная электронная библиотека ЦНСХБ