ЭлБиб

обнаружения вируса. В настоящее время для этого широко ис

пользуется полимеразная цепная реакция (ПЦР). Ранее нами

был разработан метод диагностики лейкоза КРС с помощью

«nested»-nUP (Прохватилова, 1998). С целью упрощения и уде

шевления метода нами была изучена возможность использования

одной пары праймеров для выявления генома ВЛ КРС в образцах

крови животных.

Праймеры для амплификации выбирали как в области гена

белка gP 51, так и в 3-концевой части генома (рис.1). Олигонук

леотиды рассчитывали с использованием программы «Oligo»

(версия 3.3) и синтезировали Н-фосфонатным методом на ДНК-

синтезаторе ASM-102U (Биоссет, Россия). Для исследования ис

пользовали обработанную антикоагулянтом кровь КРС, овец и

кроликов, естественно и экспериментально инфицированных ВЛ

КРС, а также секрет молочной железы и носовые истечения

больных лейкозом коров. ДНК выделяли с помощью универсаль

ной и ускоренной пробоподготовки (Компания «Биоком», Моск

ва). ПЦР проводили по разработанной методике.

Проведенные исследования показали, что сконструирован

ные системы праймеров, кроме 1 а / 1Ь, За/ЗЬ, 1F/1R, позволяли

выявлять фрагмент генома ВЛ КРС без использования «nested»-

ПЦР. При амплификации фрагмента генома из области гена gP

51 самыми эффективными оказались системы праймеров 2a/2bm

и 4-5F /2bm . Праймер 2bm отличается от использованного ра

нее праймера

Ь наличием в нем вырожденного сайта. Пары

праймеров 2a/2b , 4 -5F /4R и 4 -5 F /2 b также позволяли ам-

плифицировать вирусспецифический фрагмент во всех пробах, в

которых он был обнаружен ранее с помощью «nested^-ПЦР.

Наименее специфичными оказались праймеры 4 -5F /5R , хотя их

расположение всего на несколько нуклеотидов отличается от

расположения праймеров 4 -5F /4R . Это подтверждает выводы

других исследователей о том, что изменение локализации прай

меров в пределах одной и той же области генома может значи

тельно повышать чувствительность системы (Marsolais, 1994).

Вирусспецифические фрагменты из pXBL области генома

удавалось получать при использовании в ПЦР праймеров 4а/4Ь,

2F/2-3R и 3F/2-3R. При этом наибольшей чувствительностью и

специфичностью отличалась пара праймеров 4а/4Ь. Как нами

отмечалось ранее (Прохватилова, 1998), не во всех пробах, в ко

торых выявляли вирусспецифический фрагмент из области гена

179

Науч ая электронная библиотека ЦНСХБ