175 / 604
контролем ростовых сывороток КРС при выращивании МДВК на
наличие антител к ротавирусу КРС. Проверка проводилась в ре
акциях диффузионной преципитации и иммуноферментного ана
лиза. Использование проверенных нативных сывороток без спе
цифических антител или применение на протяжении
1 - 2
пасса
жей при культивировании клеток сывороток, истощенных ПЭГом
и также показавших отсутствие антител к ротавирусу КРС, при
вело к повышению титра инфекционности на 0,5-1 lg ТЦД
50
.
Одновременно проводился поиск чувствительных переви
ваемых культур клеток, которые также возможно было исполь
зовать в качестве производственных. Два пассажа на клетках
Mark, СПЭВ, ПСГК, Vero и ПТ выявили несколько линий, титр
вируса на которых колебался от
6 ,0
до 6,5 lg ТЦД
бо
- Э
ти
чувст
вительные культуры подходят и для титрования вируса по ЦПД,
в отличие от МДВК, которая обладает свойством в течение. 5 су
ток (срок учета) «залечивать» поврежденные вирусом участки
монослоя.
С 10-го пассажа на МДВК (основная производственная ли
ния) было испытано действие различных концентраций трипсина
при протеолитической активации ротавируса.
Увеличение количества трипсина до 25 мкг/мл в процессе
предобработки вирусной матры и до 15 мкг/мл в поддерживаю
щей среде позволило сократить сроки наступления ЦПД до 18
часов и стабильно получать вирусный материал с титром 7,5 lg
ТЦЦ
5 0
при заражающей дозе 0,1-0,01 ТЦД
5 0
/клетку При пере
воде способа культивирования ротавируса на МДВК из стацио
нарного в роллерный удалось повысить титр еще на 1,5-2 lg
Т Ц Д 50.
Таким образом, путем оптимизации репродукции был полу
чен высокоактивный вируссодержащий материал с титром 8,5-9
lg ТЦД
50
. Электронно-микроскопическое исследование показало
наличие в нём двухкапсидных вирионов с характерной для рота
вирусов морфологией.
В ИФА активность полученного препарата ротавируса коле
балась от 1:150 до 1:600. Высокий титр вирусного сырья позво
лил исключить стадию концентрирования при изготовлении инак
тивированной вакцины.
Инактивированные вакцины из такого вируса обладали вы
раженной антигенной активностью.
171
Научная электр нная библиотека ЦНСХБ