173 / 604
ровали в том же режиме; отбирали надосадочную жидкость и
соединяли с соответствующими осветленными пробами, полу
ченными после, первого центрифугирования. Осадки клеток сус
пензировали в I мл ЗФР и использовали для титрования оста
точных количеств вируса.
Осветленные вируссодержащие суспензии очищали от низ
комолекулярных белков центрифугированием при
2 0 0 0 0
об/мин
1
час в роторе 3x65 мл центрифуги Superspeed-65 через 20%-ную са
харозу, приготовленную на ЗФР с добавленными по 0,2% Triton
Х-100 или вируссодержащие осадки суспензировали в 2 мл ЗФР
и затем наносили на преформированные линейные градиенты
плотности CsCl объемом 7,5 мл и плотностью от 1,30 до 1,40,
приготовленные на ЗФР, и центрифугировали 1 час при 18000
об/мин и 20 °С в роторе 3x10 мл центрифуги Superspeed-65.
Вируссодержащие зоны с плотностью около 1,36 отбирали и
диализовали против ЗФР, объем вируссодержащей суспензии
корректировали до 1 мл добавлением ЗФР.
Исходные вирусные препараты, препараты вируса, очищен
ного на градиенте CsCl и полученного в виде гомогенатов кле
точных осадков, титровали на культуре клеток СП.
При экстрагировании и 50-кратном концентрировании AVS
с использованием Tween-20 наблюдалось значительное содержа
ние вируса в клеточном осадке; титр инфекционности вируса в
1
мл суспензии клеточного осадка составил 6,5 lg ТЦД
5 0
/мл , а в
вирусном препарате, очищенном на градиенте CsCl - 5,75 lg
Т Ц Д
50
/
мл, то есть выход высокоочищенного вируса составил
около
1 1
%.
Лучшие результаты были получены при экстрагировании и
50-кратном концентрировании AVS с использованием Triton X-
100. Клеточный осадок содержал вирус в заметно меньших ко
личествах; титр инфекционности вируса в
1
мл суспензии кле
точного осадка составил 4,0 lg ТЦД
бо
/
мл
, а в вирусном препа
рате, очищенном на градиенте CsCl - 6,5 lg ТЦЦ
5 0
/МЛ, то есть
выход вируса составил около 60%.
Таким образом, в результате проведенных исследований вы
яснено, что наиболее чувствительной из перевиваемых культур
клеток к аденовирусу свиней оказалась РК-15. Высокоочищен-
ньш препарат вируса, пригодный для иммунологических и мо
лекулярно-биологических исследований, удалось получить при
использовании для экстракции вируса 0,2% раствора Triton Х-100.
169
Научная электронная библиотека ЦНСХБ