Целью данного исследования являлась разработка оптимальных
способов культивирования и очистки аденовируса свиней.
На первом этапе была проведена отработка способа культи
вирования аденовируса в монослойных культурах клеток. В опы
тах использовали адаптированный к первичной культуре клеток
свиной почки (СП) штамм аденовируса свиней, хранившийся в
музее ВНИИ защиты животных.
Лиофильно высушенный вирус растворяли в среде Игла и
высевали на культуру клеток СП. Культивирование проводили в
среде Игла с 1-2% инактивированной сыворотки КРС. На пер
вом пассаже через 96 часов культивирования ЦПД не наблюда
ли, однако на втором пассаже через 90 часов более 95% клеток
имели характерные синцитиальные образования, и на последую
щих пассажах через 72 часа наблюдали полную деструкцию кле
ток и отделение их от стекла. Титр инфекционности с 2-го по 9-й
пассаж вырос от 5,5 до
6
,5 -7
,0
lg ТЦЦ
5 0
/мл. Титр вируса суще
ственно не изменялся при множественности заражения от
0 ,1
до
1,0 И.Е./клетку.
С целью поиска наиболее чувствительных к AVS клеток
свиного происхождения были испытаны следующие перевивае
мые культуры: РК-15, СПЭВ, "А
4
х С
2
(СПЭВ х спленоциты
свиней) и SP-12. Для заражения использовали вирус
6
-го пасса
жа на СП с титром инфекционности 6,0 lg ТЦД
5 0
/МЛ. Культиви
рование проводили в бессывороточной среде.
Характерные цитопатологические изменения наблюдали на
культуре клеток РК-15 уже на первом пассаже через 120 часов.
На СПЭВ через 140 часов культивирования изменения были ме
нее выражены, на SP-12 они проявились только на втором пас
саже через 96 часов, а на "А
4
х С
2
'* на протяжении 3 пассажей
ЦПД не наблюдали.
Получение высокоочищенного аденовируса свиней ослож
нено тем, что значительная часть вирионов связана с клеточны
ми структурами и при гомогенизации в растворах без детерген
тов не отделяется от клеток. Для поиска оптимального способа
очистки AVS нами были использованы Triton Х-100 и Tween-
2 0
.
К двум образцам по 50 мл вируссодержащей суспензии с
титром 5,0 ig ТЦД
50
/МЛ, добавляли Triton Х-100 или Tween-20
до 0,2% и, затем, центрифугировали при 3000 об/мин 5 минут.
Собирали надосадочную жидкость, а соответствующие образцы
осадков клеток гомогенизировали в объемах по 50 мл фосфатно
буферного физиологического раствора с pH 7,4 (ЗФР) с
0
,
2
%
Triton Х-100 или Tween-20. Затем суспензии клеток центрифуги
168
Научная электронная библиотека ЦНСХБ