ЭлБиб

применением хлороформа и трифтортрихлорэтана (фреона).

Очистку хлороформом (20% от общего объема) проводили при

17500g. в течение 15 мин. Очистку фреономПЗ (20% от общего

объема) проводили трижды при 4500g по 15 мин. На завершаю

щем этапе вирус осаждали через

2 0

%-сахарозу при

1 0 0 0 0 0

g в

течение

ч. Осадок ресуспендировали в STE-буфере из расчета

концентрирования в 200-250 раз от первоначального объема ви

руссодержащего сырья. Препараты антигена инактивировали аце-

тилэтилэтиленимином с внесением

0 1

% азида натрия.

Активность и чистоту полученных препаратов контролиро

вали под электронным микроскопом и электрофорезом в SDS-

PAAG. В непрямом варианте ИФА при сенсибилизации планшет

препаратами антигена в концентрации 0,02-0,05 мг/мл положи

тельные референтные сыворотки показывали титры не менее

1:1600. Гетерологические специфические сыворотки, входящие в

состав наборов коммерческих фирм KPL (США) и ВНИИЗЖ

(IBD, 1LT, IBV, АЕ, NDV, Mg, Pm и EDS-76), имели титры не

более

1 0 0

, тем самым демонстрируя строгую специфичность по

лученных препаратов антигена в отношении гомологичных антител.

Однако при оценке на стабильность при хранении на план

шетах полученные препараты реовирусного антигена показали

неодинаковые результаты. Проверку проводили через 1 /2 , 1, 2,

, 10 и 24 недели при хранении сенсибилизированных ллан-

шет при 4°С и в условиях искусственного старения при 37°С.

Активность реовирусного антигена, очищенного и сконцентриро

ванного фреоном, в течение наблюдаемого периода не снижа

лась, а коэффициенты вариации для положительной и нормаль

ной контрольных сывороток, исследованных многократно в ходе

эксперимента, не превышали 10%. При использовании в качест

ве антигена для сенсибилизции планшетов препарата, получен

ного очисткой хлороформом, уже на 4-ю неделю хранения при

4°С наблюдалось значительное снижение активности в ИФА и

полная потеря способности улавливать антитела при хранении

при 37°С. Полученные результаты говорят о предпочтительности

очистки реовирусного материала фреоном.

Таким образом, с применением метода трехкратной экстрак

ции фреоном культурального реовируса птиц был получен высо

костабильный препарат концентрированного антигена, пригодный

для создания набора ИФА с целью выявления антител к возбуди

телю реовирусной инфекции птиц в сыворотках крови кур.

132

Научная электронная библиотека ЦНСХБ