ЭлБиб

яиц самка покрывается вазэктомир.оранным самцом, который, не

эякулируя в самку семени, провоцирует овуляцию. Овуляция нат

ступает примерно через 10часов после коитуса, когда и производится

операция, В это время яйца находятся уже в трубе. Труба осторожно

вырезается, и яйца вымываются из нее раствором Паннета-Комптона

или Рингера тонкой пипеткой, вводимой либо с маточного либр

с фимбриального конца в зависимости от ожидаемого по времени

местоположения яиц* Капли вытекающего раствора принимаются

на стерилизованные слюдинки и просматриваются под микроскопом

для отыскания яиц.

Когда яйцо найдено, к промывной капле прибавляются капля

спермы, капля куриной или кроличьей плазмы и эмбриональный

экстракт» Когда прибавленная плазма образует сгусток, фиксит

рующий яйцо, культура заделывается по методу висячей капли

и сохраняется в термостате при 37°. Все манипуляции, начиная

с, промывания труб, проводятся стерильно в стерильной комнате

(боксе). \ :

Через. 40—50 минут после прибавления спермы сперматозоиды

Проникают в яйцо. Яйца млекопитающих входят в трубу с выде-

лившимся первым направительным тельцем. Второе деление созре-

вания наступает естественно лишь в результате оплодотворения.

В культурах in vitro это второе деление созревания наступает через

1—2 часа после прибавления спермы. Часов через 8 наступает пер-

вое дробление. Удавалось довести in vitro до третьего деления дро-

бления, до стадии 8 бластомеров, на что требуется до 46 часов,—

значительно больше, чем при развитии in situ, при котором стадия

8 бластомеров достигается уже через 24 часа.

Для, интересующих нас целей—дальнейшей имплантации зи-

готы в трубу—достаточно убедиться лишь в наступлении гетерогент

ного оплодотворения, т. е. продержать яйцо in vitro лишь 1—2 часа.

Дальнейшее культивирование может понадобиться лишь для того,

чтобы вообще можно было убедиться в удаче гетерогенного оплодот

творения, и для цитологической проверки. Опытами Пинкуса было

установлено, что. в нынешних условиях культуры in vitro неоплодо^

творенные яйца с некоторым запозданием, но все же начинают обна-

руживать признаки как бы партеногенетического дробления. Хотя

деление ядра при этом еще не доказано, но по внешнему виду, при

нимаемому яйцом, его оказывается .почти невозможно отличить от

нормально дробящегося яйца. Правда, в большинстве случаев, но

не всегда, образующиеся шары дробления оказываются при таком

«партеногенезе» неодинаковой величины. Так как не вполне равно-

мерное дробление происходит и при нормальном развитии яиц кро-

лика и тем большей неравномерности возможно ожидать при ге-

терогенном оплодотворении,—то наступление оплодотворения ддя

каждой гибридной комбинации должно быть проверено на окра-

шенных и нарезанных препаратах.

Для оплодотворения in vitro, особенно для длительных опытов,

•сперма должна быть получена стерильно из эпидидимиса или из

vas defferens в стерильный капиляр.

Гибридизация млекопитающих in vitro в настоящее время про-

изведена Ямане и Диомидовой и Кузнецовой (1933, неопубл.)

"151

Научная электронная библиотека ЦНСХБ