ЭлБиб

Ñàäîâîäñòâî è âèíîãðàäàðñòâî, ¹ 4, 2015

БИОТЕХНОЛОГИЯ

БАП + ИУК по сравнению с применением од-

ного БАП. Экспланты малины красной обла-

дали более высокой регенерационной способ-

ностью, чем ежевики и малины черной. Хотя

основным фактором регулирования органоге-

неза

in vitro

у большинства растений является

соотношение экзогенных ауксинов и цитокини-

нов, несомненное влияние может оказать также

интенсивность освещения на разных этапах

органогенеза [7].

Однако для плодовых и ягодных культур

уровень разработки этого метода для практиче-

ского использования еще недостаточен.

Целью наших исследований являлось изу-

чение закономерностей регенерации растений

рода

Rubus в культуре эксплантов различного

происхождения.

В качестве объектов исследований исполь-

зовали ежевику сортов Агавам, Дарроу и Торн-

фри (Rubus

sp.), малину черную сорта Кумбер-

ленд (Rubus occidentalis

L.) и малину красную

(Rubus idaeus

.) сортов Бабье лето, Глен Клова,

Скромница. Инициальные экспланты заготав-

ливали

с 2-5-летних маточных растений. Сте-

рилизацию материала проводили в 0,1 %

раст-

воре диацида в течение 10 мин. последующей

3-4-кратной промывкой

стерильной воде. На

питательную cpeду высаживали почки разме-

ром 2-3 мм и меристематические верхушки раз-

мером 0,3-0,5 мм. После 3-4 субкультивирова-

ний на среде для размножения брали экспланты

для экспериментов по регенерации. Диаметр

листовых дисков

составлял 4-8 мм, размер от-

резков междоузлий – 3-6 мм. Экспланты поме-

щали на модифицированнуюпитательную среду

Мурасиге-Скуга с добавлением следующих

компонентов

(мг/л): аскорбиновая кислота – 1,0;

тиамин, пиридоксин и никотиновая кислота –

по

0,5; мезо-инозит – 100; сахароза – 30000,

агар – 6500. рН среды устанавливали в пределах

5,5-5,7. Из регуляторов роста в питательную

среду

включали 6-бензиламинопурин (БАП)

(0,1-1,0 мг/л), гибберелловую кислоту (ГК)

(0,1 мг/л), β-индолилуксусную кислоту (ИУК)

(0,1-1,0 мг/л) и 2,4-дихлорфеноксиуксусную

кислоту (2,4-Д) (0,1-0,5 мг/л) в различных

сочетаниях. Культивирование проводили при

интенсивности освещения 2000 лк, температуре

25 °С и фотопериоде 16 ч. Число повторностей

в каждомварианте– от 12 до 30. Учитываличисло

регенерировавших эксплантов (в % к общему

числу высаженных), среднее число побегов и

листьев на 1 эксплант, cреднюю длину побегов

в миллиметрах.

Нашими наблюдениями не выявлено слу-

чаев прямого эмбриогенеза в культуре пыль-

ников ежевики и малины. Промежуточной

стадией на пути получения растений-регене-

рантов было образование каллусных тканей,

поэтому, нами были изучены факторы, оказы-

вающие воздействие на каллусогенез у пыль-

ников и регенерацию вегетативных органов в

каллусной культуре.

Способность пыльников ежевики к каллусо-

образованию зависела от фазы развития пыль-

цы и сортовых особенностей. У сортов Агавам

и Торнфри наибольший процент образования

каллусов показали пыльники, изолированные на

протяжении всего мейоза (5-13 %), а для ежеви-

ки дольчатой – от тетрад ядер до одноядерных

микроспор (до 25 %). Использование в качестве

эксплантов пыльников со зрелыми пыльцевыми

зернами во всех случаях снижало частоту об-

разования каллуса. Наибольшую способность к

каллусогенезу отмечали у пыльников ежевики

дольчатой, наименьшую – у сорта Агавам. Ци-

тологический анализ пыльцы в пыльниках, не

образовавших каллус, позволил выяснить, что

пыльца в ранней фазе развития (до образования

тетрад ядер) и поздней фазе (пыльцевое зерно)

деградировала. В фазе от тетрад до микроспор

наряду с деградацией у некоторых микроспор

отмечали остановку в развитии. Это, на наш

взгляд, свидетельствует о преимуществе исполь-

зования пыльников с пыльцой в фазе от тетрад

до микроспор по сравнению с другими фазами.

Наши эксперименты показали, что пыльники

с пыльцой, находящейся в разных фазах разви-

тия, не одинаково реагируют на минеральный

состав питательной среды. Пыльники с пыль-

цой в ранней фазе развития (до образования

тетрад) наибольшее число каллусов (8,8 % от

числа высаженных пыльников) образовывали

на относительно богатой среде Мурасиге-Скуга,

в фазах от тетрад до микроспор и зрелых пыль-

цевых зерен – соответственно на более бедных

средах Нич-Нича (8,3 %) и N6 (4,2 %). Отсюда

можно предположить, что по мере созревания

пыльцы потребность пыльников в питательных

веществах в культуре

in vitro

снижается.

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотек