ЭлБиб

Таблица 1

Праймеры для анализа микросателлитных последовательностей

в экспериментальной популяции клевера лугового

Название

праймеров

Последовательность

нуклеотидов, 5’-3’

Т отжига, °С Длина ПЦР-

фрагментов,

п.н.

Количество

аллелей

RCS4280 F-GCTNGGCCATTCAAAACTG

R-GTTGGTGAGGTCCACAAG

100-120

RCS0838 F-TGAGTAGTGCCTGGCTGCT

R-AAGAGGGTGTGGTTGTGG

200-240

RCS1640 F-TTGGAGGCTTGCTTCTGAT

R-AATCATCAAAACTGTGCG

160-180

RCS4105 F-AACCTGCTGCTGATGATGA

R-CGCAATCGCATACTGACTC

240-260

выжили всего 14 растений или 14,6% от перво-

начального числа генотипов в популяции, в том

числе, один из родителей - F141. Количество вы-

живших растений было меньше на 6,5% по срав-

нению с аналогичным показателем образцов со-

рта-стандарта (21,0%). Сохранившиеся растения

были ослаблены, некоторые были поражены фу-

зариозом (2-3 балла по шкале ВНИИ кормов) или

вирусной инфекцией. Очевидно, что более жест-

кие условия инфекционного фона, в сравнении с

провокационным фоном, явились основной при-

чиной низких показателей проявления признака

устойчивости растений.

По результатам двухлетних наблюдений были

выявлены 5 образцов, сочетающие комплексную

устойчивость к возбудителям склеротиниоза и

фузариоза. Выделенные образцы были выкопаны

и перенесены в теплицу, т.к. представляют значи-

тельную ценность для селекции на болезнеустой-

чивость и дальнейших исследований по ДНК-

маркированию хозяйственно-ценных признаков.

Для выявления ДНК-полиморфизма провели

генотипирование растений экспериментальной

популяции клевера лугового в тестовом режиме

(родители и 10 генотипов потомства). По результа-

там анализа из 45 испытанных пар SSR-праймеров

лишь с 4 комбинациями получены стабильные

продукты амплификации с сегрегацией в потом-

стве (табл. 1). Их использовали для тестирования

всей популяции. В совокупности информативные

праймеры детектировали 323 микросателлитных

фрагмента размером от 100 до 260 пар нуклеоти-

дов (п.н.). Из общего числа локусов 123 или (30%)

были от обоих родителей, тогда как 38 (11,7%) и

27 (8,3%) были специфичны для F113 и F141, соот-

ветственно. Число аллелей на локус варьировало

от 1 до 3.

В качестве примера, демонстрирующего вну-

трипопуляционный полиморфизм в исследуемой

популяции, на рисунке 2 представлена электро-

фореграмма разделения ПЦР-фрагментов, полу-

ченных в результате амплификации с праймерной

парой RCS1640.

Анализ ко-сегрегации между продуктами ам-

плификации и фенотипическими проявлениями

признака зимостойкости в популяции клевера лу-

гового позволил выявить 6 достоверных корреля-

ций с различной направленностью (табл. 2). Так,

достоверная положительная взаимосвязь с зимо-

стойкостью выявлена у генотипов с отсутствием

продуктов амплификации при генотипировании

праймерными парами RCS1640 и RCS4280, а также

у генотипов с ампликоном «a», размером 200 пар

нуклеотидов, и сочетанием ампликонов «с» и «b»

при генотипированиипраймернойпаройRCS0838.

Достоверная отрицательная взаимосвязь с зимо-

стойкостью выявлена у генотипов, дающих соче-

тание ампликонов «a» и «b» при генотипировании

праймерными парами RCS1640 и RCS 4280. Кроме

этого, отсутствие ампликона при генотипирова-

нии праймерной парой RCS0838 также достоверно

коррелировало с зимостойкостью генотипов экс-

периментальной популяции клевера лугового.

Разнонаправленный характер взаимосвязи

Электронная Научная СельскоХозяйственн я Библиотека