ЭлБиб

культур является создание исходного материала,

устойчивого к патогенам. Поиск генетических ис-

точников и доноров устойчивости и разработка на

их основе устойчивых сортов является важной

задачей селекционных подразделений.

Новые возможности в развитии этого направ-

ления открылись с появлением методов маркер-

вспомогательной селекции, основанных на ис-

пользовании ДНК-маркеров, тесно сцепленных с

генами хозяйственно-ценных признаков. Исполь-

зование ДНК-маркеров при селекции на устойчи-

вость к болезням позволяет интенсифицировать

отбор растений, устойчивых к разрушительному

действию патогенов, а также существенно сокра-

тить временные и финансовые затраты [2; 3].

В настоящее время большой интерес для прак-

тической селекции представляет технология гено-

типирования на основе анализа полиморфизма

микросателлитов, так называемый SSR-анализ.

Гипервариабельность микросателлитных последо-

вательностей и равномерность распределения их

по геному в сочетании с простотой обнаружения,

а также высокая воспроизводимость результатов

делает микросателлиты незаменимым инстру-

ментом для выявления внутрипопуляционного

пула ДНК-полиморфизма, детекции генов количе-

ственных признаков и построения генетических

карт [4; 5].

На основе микросателлитных маркеров была

разработана насыщенная генетическая карта кле-

вера лугового [6; 7]. В совместном проекте ВНИИ

кормов им. В.Р. Вильямса и Хоккайдского центра

сельскохозяйственных исследований (Япония) на

протяжении нескольких лет проводятся исследо-

вания по ДНК-маркированию селекционно-цен-

ных признаков и свойств этой важной кормовой

культуры.

Цель настоящего исследования заключалась в

изучении возможности создания универсального

набора микросателлитных праймеров для анали-

за популяций клевера лугового, использования

их в селекции на зимостойкость и устойчивость

к склеротиниозу в условиях Нечерноземной зоны

России и выделение генетических источников

устойчивости к этой болезни.

Материал и методы исследований

Объектом исследования служила эксперимен-

тальная популяция клевера лугового ГР (гибрид-

ная ранняя), которая была получена в отделе ге-

нофонда ВНИИ кормов им. В.Р. Вильямса путем

скрещивания генотипов популяции HRxR130

[7; 8], прошедших предварительную двухлетнюю

оценку на склеротиниозном провокационном

фоне с повышенной инфекционной нагрузкой.

В качестве родительских форм для создания

родственной популяции были отобраны генотипы

с альтернативным проявлением признаков – F113

и F141. Материнское растение F113 – раннецве-

тущее, с высокой восприимчивостью к возбуди-

телю клеверного рака, F141 – отцовская форма,

позднецветущая, с относительной устойчивостью

к болезни. Искусственное опыление проводили

в условиях теплицы с использованием методиче-

ских разработок ВНИИ кормов [9; 10].

Семена, полученные от скрещивания, высе-

яли в пластиковые стаканчики и выращивали в

теплице до трех настоящих листьев. Затем расте-

ния были высажены в поле на искусственном ин-

фекционном фоне иммунологического питомника

ВНИИ кормов для изучения устойчивости к скле-

ротиниозу и отбора перспективных генотипов.

Растения размещали индивидуально 25х45 см. В

качестве контроля использовали сорт-стандарт

ВИК-7. В общей сложности было высажено 122 ге-

нотипа. Основные учеты пораженности проводи-

ли в течение второго и третьего годов жизни рас-

тений, согласно методическим указаниям ВНИИ

кормов [10; 11]. После первой и второй перезимо-

вок, весной 2008 и 2009 гг., регистрировали выпав-

шие и оценивали степень поражения выживших

растений с использованием модифицированной

шкалы, разработанной во ВНИИ кормов [11].

В сентябре, накануне первой зимовки, из мо-

лодых свежесобранных листьев растений была

выделена геномная ДНК с помощью коммерческо-

го набора DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Нидер-

ланды), по инструкции изготовителя.

Для амплификации использовали набор SSR-

праймеров с известной последовательностью ну-

клеотидов, которые были разработаны в институ-

те ДНК-исследований (Казуса, Япония) [8].

Полимеразную цепную реакцию проводили в

объеме 15 µl, содержащем 1х реакционный буфер

и 2,5 ед. рекомбинантной Tag-полимеразы компа-

Электронная Научная Сельск Хозяйственная Библиотека