ЭлБиб

нии «Helicon» (Москва), 0,25 mM каждого dNTP,

0,25 µM каждого праймера. Реакции были постав-

лены с использованием программы, включающей

3 мин начальной денатурации при 94ºС; 3 цикла

по 30 с при 94ºС и 30 с при 68ºС, следующие два

повтора той же программы, но при снижении тем-

пературы отжига и элонгации праймеров на 2ºС

каждые три цикла, затем 4 повтора программы из

3 этапов, с температурным режимом , включаю-

щим 30 с при 94ºС, 30 с при 62ºС и 30 с при 72ºС,

последующие 3 повтора той же программы, при

снижении на 2ºС температуры каждые три цикла

с заключительной элонгацией в течение 10 мин

при 72ºС. Для проведения ПЦР использовали ам-

плификатор BIO-RAD (США). Продукты ампли-

фикации разделяли с помощью горизонтального

электрофореза в высокоразрешающем 4% агароз-

ном геле (MetaPhor Agarose, BMA, USA). Для ста-

тистического анализа экспериментальных данных

использовали пакет программ для персонального

компьютера Statistica 6.

Результаты и обсуждение

Несмотря на то, что экспериментальный ма-

териал был получен от исходных образцов, по-

казавших контрастную устойчивость в предвари-

тельных испытаниях на провокационном фоне,

резистентность к возбудителю склеротиниоза на

инфекцинном фоне отмечена у немногих геноти-

пов. По результатам первой перезимовки весной

2008 года из 96 растений популяции выжили лишь

46, что составляет 44,2%. По наличию черных скле-

роциев в сохранившихся остатках розетки и сте-

блях была определена основная причина гибели

большей части изучаемых генотипов.

На основе оценки признаков проявления за-

болевания была проведена классификация пере-

зимовавших образцов по 4-х балльной шкале, где

4 балла – высокая устойчивость, с отсутствием

признаков поражения, 1 балл – сильная воспри-

имчивость, с поражением более 80% [11]. Отно-

сительно устойчивыми и слабо восприимчивыми

к раку (поражение не превышало 25%) оказались

16 генотипов или 16,7% от высаженных. У 13 ге-

нотипов (13,5%) отмечена высокая восприимчи-

вость к патогену (поражение более 50,0%). Среди

растений стандарта уровень восприимчивости к

болезни был также высоким, более 63% растений

погибли после первой перезимовки. Оставшиеся

образцы (36,8%) имели слабую степень пораже-

ния, их можно было условно отнести к устойчи-

вым или слабовосприимчивым,- поражение не

превышало 5,0-20,0% (рис. 1.)

После второй перезимовки было обнаружено,

что в условиях высокой инфекционной нагрузки

Рис. 1.

Оценка устойчивости к склеротиниозу

(

Sclerotinia trifoliorum

Eriks.) генотипов

экспериментальной популяции клевера

лугового (искусственный инфекционный

питомник, май 2008 г.).

1, 2 – относительно устойчивые генотипы

(3 балла по шкале ВНИИ кормов);

3 – восприимчивый к патогену генотип

(0 баллов по шкале ВНИИ кормов).

Электронная Научная СельскоХозяйственная Би лиотека