262 / 318
ГЕНЕТИКО-СЕЛЕКЦИОННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
251
ных маркеров. В рамках проекта «Морфолого-физиологическая и биохи
мическая паспортизация и создание базы данных на электронном носите
ле коллекции сирени ЦБС НАН Беларуси» проведены исследования бел
ковых спектров фракций хлоропластов сирени
Syringa vulgaris,
методом
градиентного ДСН-электрофореза, при этом показано, что спектры стро
мальных белков обнаруживают четкие качественные и количественные
изменения от сорта к сорту, что дает основание использовать их в целях
сортовой идентификации. Денситограммы стромальных белков из хлороп
ластов сирени, которые позволяют оценивать экспрессию белка и сравни
вать образцы между собой вместе с электрофоретическими треками, внесе
ны в компьютерную базу данных. База дополнена данными по фенольным
соединениям листьев различных сортов сирени, изученными методом газо
вой хроматографии. При этом показано, что содержание о-гидроксикорич-
ной кислоты, рутина и др. варьирует незначительно, а тиразола от 0,18 до
0,78 мг/г, что говорит о том, что его можно использовать в качестве хемо-
таксономического признака при диагностике различных сортов сирени.
Начиная с 2004 г. в ЦБС НАН Беларуси начались работы по изучению
генома этой культуры с помощью RAPD-методов, позволяющих маркиро
вать имеющиеся в коллекции дикорастущие виды и культурные сорта.
RAPD технология имеет рад преимуществ по сравнению с другими под
ходами исследования генетической изменчивости. Изучение произвольно-
амплифицированно'й полиморфной ДНК (RAPD) позволяет анализировать
большое количество локусов одновременно и сопоставлять значительные уча
стки генома, что повышает точность сравнительного анализа и делает более
вероятным нахождение дивершровавших последовательностей. Простота этого
метода обеспечивается тем, что он не требует предварительного знания спе
цифической последовательности амплифицируемой ДНК, поэтому для его
проведения используются праймеры, отобранные произвольным образом.
Для RAPD-анализа генома сирени из коллекции ЦБС НАН Беларуси
были отобраны следующие представители: 4 вида
Syringa amurensis, S. pekinensis,
S. chinensis, S. vulgaris
и следующие сорта: Хорошее настроение, Павлинка,
Лунный свет, Вера Хоружая, Президент Греви, Лебедушка, Минчанка, Кра
савица Москвы, Радж Капур, Роялти, Реомюр, Эстер Стейли, Нестерка, Пре
зидент Пуанкаре). Препараты суммарной ДНК получали по методике [2] из
листьев растений. В работе использовали 10 олигонуклеотидных десягичлен-
ных праймеров. В результате предварительного анализа для RAPD-маркиро
вания генома сирени были отобраны
6
праймеров (табл.
1
). Продукты ПЦР
разделяли и визуализировали по стандартным методикам [3].
Таблица 1
Сведения о праймерах
Название
праймера
Размер
(в нукл.)
Нуклеотидная последовательность
(5’- 3 ’)
Температура отжига, °С
Oligo 12
10
CACAACGGGT
28,0
Oligo 13
10
AAACCTGGAC
38,0
Oligo 14
10
AGAATAGGGC
29,0
Oligo 15
10
ATCGTCCAAC
29,0
Oligo 16
10
GCCCCTCGTC
44,0
Oligo 18
10
CAATCGCCGT
28,0
Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека