244 / 308
дике (Луцик, Панасюк, Луцик, 1981). На первом этапе была проведе
на экстракция корней, листьев, стеблей, соцветий и плодов фосфатно-
цитратным буфером на основе физиологического раствора с pH 4.2;
7.0;
8.0
в соотношениях сырье: экстрагент 1:5 и 1:10. При этом лекти
ны не были обнаружены, что могло быть связано с их низкой концен
трацией в растворе. Затем были взяты плоды и проведено их низко
температурное этанольное фракционирование в четыре этапа. После 2-
х часовой экстракции (
1
:
10
) раствор охлаждали до 4°С, насыщали 96°
этанолом до 20%-ной конечной концентрации и доводили до рН=3.0
1н.НСе. Смесь выдерживали 2 часа при +4*С и полученный осадок от
деляли центрифугированием (15 мин. при 3000 об /м ин ), растворяли
в 1 мл физраствора и оценивали на активность агглютинации. Супер
натант доводили до рН=8,0
1
н.ЫаОН, охлаждали 2 часа и опять цен
трифугировали. Осадок растворяли в
1
мл физраствора. Второй, тре
тий и четвертый этапы заключались в последовательном насыщении
надосадочной жидкости охлажденным 96° этанолом до 35%, 50% и 76%
конечной концентрации с отделением осадка после каждого этапа.
Осадок и надосадочная жидкость в каждом этапе проверялась на
наличие лектинов. При этом реакция агглютинации регистрировалась
только в двух вариантах: при
20
%-ном насыщении этанолом с рН=3,0
(титр агглютинации 1:256) и рН=8,0 (титр 1:512).
Нами установлено, что оптимальными условиями для оценки ак
тивности лектинов было насыщение экстракта этанолом до
20
%-ной
конечной концентрации, доведение раствора до рН=8,0, охлаждение и
центрифугирование. Полученный осадок проявлял высокую актив
ность в реакции с эритроцитами 0 (1 ), А(И) и AB(IV) групп крови че
ловека в системе АВО. Титр агглютинации достигал 1:1024.
В процессе экспериментов была отмечена следующая важная осо
бенность: при последовательном разведении лектина в лунках планше
та его активность вначале высокая, затем снижается, после чего опять
повышается. Таким образом, наблюдалось торможение реакции агглю
тинации, сходное с тем, что происходит при определении наличия
взаимодействия углеводов с лектинами. Вероятно, это было вызвано
наличием в растворе полисахаридного, комплекса, .который '.'маскиро
вал" активность лектинов, что следует учитывать при поиске лектинов
в растениях. Указанная особенность определения активности лектинов
у эхинацеи пурпурной наводит на мысль, что используя их углевод
ную специфичность можно разработать простой и быстрый метод
оценки не только качественного, но и количественного состава углево
дов в растительных экстрактах.
240
Научная электронная библиотека ЦНСХБ