437 / 454
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ХИТООЛИГОСАХАРИДОВ НА
ЛОКАЛИЗАЦИЮ АНИОННОЙ ПЕРОКСИДАЗЫ В
СОВМЕСТНОЙ КУЛЬТУРЕ КАЛЛУСОВ ПШЕНИЦЫ С
ВОЗБУДИТЕЛЕМ ТВЕРДОЙ ГОЛОВНИ МЕТОДОМ
ИММУИОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
Л.Г. Яруллина, Е.А Черепанова, О.Б. Сурина, И.В Максимов
Институт биохимии и генетики УНЦ РАН, Россия, Уфа
Известно, что под воздействием стрессоров биотической и
абиотической природы культивируемые ш
vitro
клетки растений
секретируют во внешнюю среду различные белки, среди которых
выявлены изоферменты пероксидазы (Okuschina et al., 2001;
Минибаева, 2004). Усиление секреции защитных белков
происходит и под воздействием элиситоров (Озерецковская, 2003).
Показано, что защитное действие анионной пероксидазы
обусловлено
участием
в
процессах
синтеза
лигнина
(Hammerschmidt, 1997). Лигнифицированные ткани устойчивы как
к механическому повреждению, так и к гидролитической атаке
патогенов.
Одним из высокочувствительных методов, используемых
для количественной оценки белков, является твердофазный
иммуноферментный анализ (ИФА ). Неоспоримым достоинством
этого метода является быстрота и возможность оценки ничтожно
малого количества белка в растительном экстракте. Одним из
основных этапов в постановке этого метода является получение
антител к анионной пероксидазе. Выделение и очистку анионной
пероксидазы из корней 4-х суточных проростков мягкой пшеницы
проводили по методике (Максимов и др., 2005). Для получения
антител к анионной пероксидазе, кроликов иммунизировали, вводя
внутримышечно белок в возрастающей концентрации, начиная с
0,5 мг. Сыворотку получали общепринятыми методами. Антитела
частично очищали высаливанием сульфатом аммония (Эрнст,
Тесман, 1979).
Для
проведения
ИФА
полистироловые планшеты
сенсибилизировали белком при 37°С в течение 1,5 ч. Для удаления
428
Научная электронн я библиотека ЦНСХБ