ЭлБиб

ДЕЙСТВИЕ ЦИТОКИНИНА И ПОЛИАМИНА НА

СЕМЯДОЛИ АРАБИДОПСИСА: УЛЬТРАСТРУК-

ТУРНЫЙ АНАЛИЗ

Б. Ю. Болякина, Н. Ю. Ракова,. Г. А. Романов

Институт физиологии растений РАН, Москва, Россия, (095)977-94-61

E-mail:

Изучали влияние полиамина (спермина) на ультраструктурную

организацию клеток мезофилла в семядолях 4-х дневных неэтиолиро-

ванных проростков трансгенного арабидопсиса с репортерным геном

GUS

под контролем промотора цитокинин-зависимого гена

ARR5..

Изолированные семядоли инкубировали в течение 1 часа на.воде (кон

троль), а в опытном варианте - с 5 мкМ 6-бензиламинопурина (БА), с

50 мкМ спермина (Сп) и одновременно со спермином и гормоном (БА-

Сп). Действие гормона контролируется по индукции экспрессии ре-

портерного гена

GUS.

Спермин в выбранной концентрации резко ин

гибировал индукцию GUS-активности (65%).

Для электронномикроскопического изучения (ЭМИ) семядоли

фиксировали в р-рах 4% параформальдегида и 2,5% глютарового аль

дегида, приготовленных на 1М какодилатном буфере, pH 7,2 (3 ч). По

сле промывки буфером образцы постфиксировали в !% О (2ч) при 4 С.

Обезвоживали в этаноле и окиси пропилена, пропитывали и заливали

в эпоксидную смолу. Ультратонкие срезы получали на ультратоме,

контрастировали 1% уранилацетатом и 0,2% цитратом свинца. На

блюдение и съемку проводили на просвечивающем электронном мик

роскопе. Органеллы клеток анализировали на электрономикроскопи

ческих негативах (не менее 20-30 от каждого варианта).

В семядолях проростков контрольного варианта ультраструктура

клеток мезофилла в близка к организации меристематических клеток.

Цитоплазма довольно плотная, в ней много свободных моносом, вид

ны остатки неиспользованных запасных веществ в виде алейроновых

зерен (в вакуолях) и липидных капель. ЭР представлен отдельными

каналами. Круглое гомогенное ядро обычно расположено в центре,

занимает значительную часть объема клетки. Глыбки конденсирован

ного хроматина равномерно распределены в кариоплазме ядра. Элек

тронноплотные ядрышки состоят из компактно упакованных компо

нентов (гранулярных и фибриллярных РНП), в которых преобладают

201

Научная электронная библиотека ЦНСХБ