356 / 392
Агротехнологии
пользуется визуальная оценка и метод сканирования хроматограмм. Методика позволяет быстро и безошибочно
определить, какой тип штамма представляет исследуемый индивидуальный склероций. Несмотря на различие
биологических показателей внутри отдельного типа спорыньи, каждый из перечисленных выше коллекционных
штаммов имеет свою, специфичную хроматографическую характеристику — которая выражается в качественных
и количественных показателях продуцирования всей суммы .эргоалкалоидов [6] (рис.1).
Используемая методика позволяет за один анализ провести определение от 20 до 40 индивидуальных склеро-
циев, при ежегодном изучении около 1000 склероциев различных линий штаммов. Проводится полное исследо
вание химического состава каждого индивидуального склероция, для чего первоначально, с использованием ко
лориметрического метода определяется содержание всей суммы алкалоидов, далее проводится определение
компонентного состава эргоалкалоидов и количественного содержания каждого компонента в смеси [б].
На основании полученных данных ведется отбор перспективных склероциев для воспроизводства штаммов
спорыньи и отбраковываются низкопродуктивные и нетипичные склероций, присутствие которых может привес
ти к нежелательным изменениям селекционного штамма. Отбор проводится на основании данных всего спектра
эргоалкалоидов, где учитывается содержание не только целевых эргоалкалоидов, но и наличие минорных и сопут
ствующих алколоидов, в том числе из ряда не желательных. Отобраны после химического анализа склероций ис
пользуются для воспроизводства штаммов спорыньи через полевые мелкоделяночные опыты.
В случае необходимости, для проведения более углубленного исследования отобранных методом ТСХ элит
ных и суперэлитных склероциев (для прямой идентификации целевых эргоалкалоидов, или определения содер
жания целевых эргоалкалоидов, имеющих недостаточную степень разделения методом ТСХ), используются ме
тоды ЯМР-спектроскопии[15-16] и ВЭЖХ.
Описанный метод проведения конкурсных испытаний различных штаммов позволяет не только поддерживать,
но и улучшать коллекционные штаммы спорыньи, получая высокопродуктивные линии. Например, в 1997 г полу
чен новый эргокриптиновый штамм F-3602D с содержанием суммы алкалоидов 0,9%. В 1998 г получен эргокрис-
тиновый штамм F-3401D с суммой алкалоидов 0,45%.
В настоящее время, работы по селекции штаммов спорыньи заключаются в изучении и совершенствовании
технологий культивирования гриба, повышении его биопродуктивности, исследовании воспроизводимости раз
личных штаммов спорыньи в зависимости от воздействия внешних факторов, изучении химического состава и его
изменений в процессе проведения селекции и др.
Одновременно, используемая методика позволяет проводить изучение нетипичных, отбракованных склероциев,
образование которых может быть связано со спонтанной мутацией спорыньи или какими либо другими факторами.
Эти работы необходимы для проведения исследований по селекции новых линий или типов штаммов спорыньи.
Так, в 1995 г, при проведении селекционных работ с промышленным штаммом спорыньи, продуцирующем
сумму эргокриптинов, был выделен нетипичный склероций, образование которого было связано с процессом
спонтанной мутации. Выделенный склероций по своему компонентному составу эргоалкалоидов не соответство
вал ни одному типу коллекционных штаммов спорыньи [17]. На протяжении пяти лет с выделенной линией споры
ньи проводились селекционные работы, в результате которых, был получен новый, пятый тип штамма спорыньи F-
3662D, пополнивший к 2000 году коллекцию штаммов спорыньи ВИЛАР — V — Эргокорнамовый штамм спорьюьи,
продуцент алкалоида лактамного ряда эргокорнама (4) (рис.1). Выделенный новый штамм перспективен для при
менения в фармацевтической промышленности как продуцент прекурсоров в полусинтезе ряда лекарственных
препаратов, что относится к наукоемким технологиям.
Таким образом, до настоящего время, ВИЛАР остается ведущей организацией на территории СНГ, где сохра
нилось направление работ по селекции и обеспечению отечественной сырьевой базы спорыньи, содержащей
пептидные эргоапкалоиды.
Список литературы
1 И.А. Масалаб, Методы паразитарного культивирования спорыньи для медицинских целей, М.: Медгиз, (1941);
2 ЕС
.
Заболотная, Алкалоиды спорыньи. / / Сборник научи, трудов ВИЛАР, М.: Медгиз, вып.Х, 189-246(1950).
3 ЕС. Заболотная, Содержание алкалоидов в дикорастущей спорынье в зависимости отрайонов произрастания
/ / Сборник научн.трудов ВИЛАР, М.: Медгиз, вып.Х!, 254-267(1959).
4 НМ. Островский, А.Н. Баньковская, А.И. Шалагина, Природная спорынья как возможный источник штаммовдля
получения эргоалкалоидов в сапрофитной культуре. //Растит. Ресурсы. Т.5(3), 323-329 (1969).
5С.С. Шаин, Возделывание спорыньи на ржи. / / Лекарствен.растениеводство. 06-зорн.информ., вып. Т.4, Моск
ва (1987), с. 46.
6 Е.Л. Комарова и С.С. Шаин, Идентификация селекционных штаммов спорьюьи по алкалоидному составу инди
видуальных склероциев НХ.Ф.Ж, 32,34-37(1998).
7 Патент№ 2102470 от2 августа1995 г «Штамм гриба Claviceps purpurea Tul. продуцент эргокристина»! С.С. Ша
ин, ВЛ . Быков, Е.Л. Комарова и др.
8 Патент№ 2118661 от 19 мая 1997 г
«Штамм гриба Claviceps purpurea Tul.
—
продуцент эргокриптинов» 1 С.С.
Шаин, В.А. Быков, В.В.Вандышев, Е.Л. Комарова и др.
9 А. Н. Баньковская, Н.И. Островский, А. И. Баньковский Изучение содержания и качественного состава алкалои
дов в спорынье, паразитирующей на ржи в различных районах СССР II Лекарственные растения, М.:Колос, Т.
15,418-456(1969).
10 Е.С. Заболотная, Об алкалоидах спорыньи, паразитирующих на некоторых видах злаков, а также полученных
при сапрофитной культуре этих рас спорыньи. Сборник на-учн. трудов ВИЛАР, М.: Медгиз, вып. XI, 3 87-400
(1959).
11 Е.С. Заболотная, Содержание алкалоидов в спорынье, паразитирующей на различных дикорастущих злаках и
гибридных формах ржи и пшеницы / / Аптечное дело, Т.86(5), 27-32(1959).
12 А.Н Баньковская, Н.И. Островский, А.И. Баньковский Изучение содержания и качественного состава алкалои
дов спорыньи, паразитирующей на дикорастущих злаках и гибридных растениях //Лекарственные растения, М.:
Колос, Т. 15,442-456(1969).
354
Научная электронная библиотека ЦНСХБ