45 / 604
ВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ
УДК 619:578.823.2:636.52./58
Метод концентрирования
и очистки птичьего реовируса
для молекулярно-биологических исследований
Д.Б. Андрейчук
,
А.И. Куприянов, ГМ. Фалина, С.К Старов,
В.В. Дрыгин
Всероссийскийнаучно-исследовательскийинститутзащитыживотных, г. Владимир
Для изучения реовируса молекулярно-биологическими мето
дами необходимо получить очищенный вирусный концентрат.
При очистке вируса из патматериала (суставы лап с приле
жащими тканями) готовили 20%-ную суспензию в STE (рН7,7) с
помощью коллоидной мельницы с добавлением 20% фреона 113.
Суспензию осветляли при
11
0 0 0
g
15 минут. К надосадку до
бавляли 0,15 М NaCl и 7,5% ПЭГа (М 8000) и центрифуги
ровали при 18 000 g 25 минут. Осадок растворялся в 1 /1 0 объ
ема (от первоначального) STE с добавлением 30% фреона 113 и
центрифугировался при 11
0 0 0
g 15 минут. Вирус осаждали
ультрацентрифугированием через слой 40%-ного раствора саха
розы (30% от объема пробирки; 100 000 g, 1,5 часа). Осадки ре-
суспендировали в 1 мл STE.
Вирус был сконцентрирован в 250-5 00 раз.
Применением фреона удалось избавиться от Mycoplasma
synovia, ассоциированной с реовирусной инфекцией и затрудня
ющей культивирование вируса.
С использованием данной методики нами был выделен изо-
лят птичьего реовируса из патматериала с птицефабрики «Таган
рогская». После очистки и концентрирования вируса был произ
веден посев на культуру эмбриональных куриных фибробластов.
Для получения высокоочищенного концентрированного ви
русного препарата в 2“ 4 л вируссодержащей культуральной кле
43
Научная электронная библиотека ЦНСХБ