ЭлБиб

Опыт получения первичной культуры

клеток почек щенка

Т.Н. Буркун, Т.А. Савельева

А.К Бурно

Белорусский НИИ экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского, г. Минск

Первичная культура почек щенка (ПЩ) и ее субкультура

используются для выделения* титрования и накопления вирусно

го сырья.

В нашей работе за основу взяты методические подходы по

лучения первичной культуры ПЭК, описанные в отечественной и

зарубежной литературе, которые апробированы и модифициро

ваны с учетом условий работы лаборатории.

Материалом для выделения первичных клеток служили поч

ки щенков в возрасте от 2 дней до 6 недель. Животных обес

кровливали, снимали шкуру, переносили в стерильные комнаты,

где извлекали почки. Трипсинизация проводилась дробно в тече

ние 2,5 часа 0,25%-ным раствором трипсина. После подсчета

клеток в работу брали суспензию, разведенную ростовой средой

до конечной концентрации 500000 в 1 мл. Ростовой средой слу

жили 0,5%-ный гидролизат лактальбумина (ГЛА) и ИГЛА с глю

тамином и добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота

и антибиотиков в обычной концентрации. Формирование клеточ

ного монослоя наступало на 5-е сутки. После этого проводили их

пересев с коэффициентом 1:3. При очередных пересевах клетки

снимали смесью 0,02%-ного раствора версена и 0,25%-ного рас

твора трипсина в соотношении 9:1 бесцентрифужным способом,

посевная концентрация - 500000 клеток в 1 мл. Монослой обра

зовывался через 3 дня и держался до 10 суток (срок наблюде

ния). Начиная с 3-го пассажа использовали ростовую среду с

0,3% ферментативного гидролизата мышечных белков (ФГМС) с

добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. При этом

наблюдали образование полноценного монослоя через 48-72 часа,

клетки морфологически не изменялись, пролиферация их была

стабильной, как и при использовании стандартных ростовых сред.

Начиная с 12-го пассажа, начиналось угасание роста. Наряду с

синцитиальным монослоем встречались округлые нечеткие клетки,

пролиферация снижалась пропорционально количеству пассажей, и

на 18-ом пассаже митотические процессы полностью прекратились.

Таким образом, для получения культуры клеток ПЩ можно

использовать в качестве ростовых сред ГЛА, ИГЛА и ФГМС и

культивировать ее субкультуру до 12-го пассажа без видимых

морфологических и митотических изменений.

УДК 619:576.535.

439

Научная электронная библиотека ЦНСХБ