ЭлБиб

в свиноводческих хозяйствах во многих странах мира (Wendt,

1998). Ранее мы сообщали о первом случае выделения A. suis в

Омской области (Плешакова, 1998). Целью данного исследова

ния было изучение различия между штаммами A. suis, выделен

ными в разных странах. Предложенный Grimont et Grimont

(1986) метод риботипизации («ribotyping») позволяет дифферен

цировать штаммы в том случае, когда классических методов ока

зывается недостаточно. При риботипизации речь идет о поли-

форфизме нуклеотидного состава генов, кодирующих рибосо-

мальную РНК (рРНК). Мы применили риботипизацию для срав

нения 28 штаммов A. suis, выделенных в разных странах.

Исследовано 17 штаммов, выделенных в Омской области в

1998-1999 гг., 10 штаммов, выделенных в Северной Германии в

1990-1997 гг., а также международный референтный штамм А.

suis NCTC 10173. Бактерии культивировались на колумбийском

агаре при 37 °С в течение 48-72 ч. Для риботипизации общая

ДНК клетки была получена, как описано у Sambrook et al.

(1989). Расщепление ДНК с энзимом BatHI (NEB, Bat Schwal-

bach. Germany) проводилось в соответствии с инструкциями

производителя. Фрагменты ДНК разделялись в 0,6%-ном огароз-

ном геле при 199 В в течение 2 ч. Перенос ДНК на нейлоновую

мембрану (блоттинг по Саузерн) и ДНК-ДНК гибридизация про

водились как описано у Sambrook et al. (1989). В качестве зонда

для детектирования генов рРНК плазмида рКК3535, содержащая

рРНК-гены Е. соН, была маркирована радиоактивным изотопом фос

фора 32Р по методу Feinberd и Vogelstein (1983). Сходство профилей

изолятов A. suis определялось по коэффициенту Жаккарда. Дендро

грамма была создана с использованием метода UPGMA.

Экспериментально доказана применимость риботизации для

дифференцирования штаммов A. suis, неотличимых по фенотипи

ческим признакам. При риботипизации 17 омских, 10 немецких

изолятов и референтного штамма A. suis NCTC 10373 отмеча

лось 20 различных профилей. При этом все изоляты из Омска

проявляли 12 различных профилей, а изоляты из Северной Гер

мании - 7. Некоторые изоляты имели одинаковые профили. Так,

среди немецких изолятов отмечалась идентичность между А

1743/90, А2737 и А4046/92, а также между А1536/90 и А

4631/92. Из русских 100%-ное сходство профилей проявляли

изоляты 21 МК, 25 МК и 27МК, 11ПР и 22Мк, 1А и ЗА, а также

ЗМК 4МК. Как немецкие так и русские изоляты образовали кла

стеры с 75-40% сходства внутри групп. Профили штаммов, вы

деленных от животных одного хозяйства, проявляли более высо

кое сходство, чем профили изолятов, выделенных от животных

311

Научная электр нная библиотека ЦНСХБ