ЭлБиб

культур стандартных диагностических штаммов, обладающих ши

роким диапазоном внутригрупповых антигенных связей.

Целью настоящих исследований явилась разработка отече

ственного диагностического препарата для выявления специфи

ческих противолептоспирозных антител в клиническом материа

ле от больных острыми и хроническими инфекционными заболе

ваниями различной этиологии, не исключающей лептоспироз.

В работе использовали микробные культуры патогенных

лептоспир L.interrogans серогрупп Icterohaemorragiae (шт. М-20),

Canicola (шт. Каширский), Pomona (шт. Pomona), Grippotiphosa

(шт. Москва-5), Tarassovi (шт. Перепелицын), Hebdomadis (шт.

Hebdomadis), полученные из НИИ эпидемиологии и микробиоло

гии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН РФ.

Лептоспиры выращивали на среде Терских, содержащей 5%

кроличьей сыворотки. Посевная доза - 1-1,2х106

кл

мл

Куль

тивирование проводили в течение 12—14 дней при 28-30°С. Кон

троль роста лептоспир производили микроскопированием «в

темном поле» микроскопа «Микмед-1» (ЛОМО, РФ) при увели

чении х400. При наличии активного роста культур (100-150

лептоспир в поле зрения микроскопа) проводили пересев на

свежую питательную среду.

Антигенные препараты готовили путем центрифугирования

монокультур лептоспир при 2000 об/мин, 15 мин и 10000

об/мин, 10 мин, с последующей инактивацией 0,025% раство

ром глютаральдегида (Sigma, США). Затем лептоспиры разводи

ли фосфатно-солевым буфером, pH 7,2-7,4, до рабочей концен

трации (80-100 микробов в поле зрения микроскопа при увели

чении х400) и ампулировали. Всего было получено и апробиро

вано 5 серий моновалентных антигенных препаратов.

Активность и специфичность приготовленных антигенов ис

следовали в РМА серогруппоспецифическими сыворотками, вы

пускаемыми Должанской биофабрикой (Витебск), а также груп

повыми агглютинирующими лептоспирозными сыворотками, по

лученными иммунизацией кроликов монокультурами лептоспир

серогрупп Icterohaemorragiae, Canicola, Pomona, Grippotiphosa,

Tarassovi, Hebdomadis, содержащими lxlO8 - 2xl08 кл/мл.

Взвесь лептоспир вводили кроликам в краевую вену уха пяти

кратно с интервалом 5-7 дней в объемах (в мл): 0,5, 1,0, 2,0,

3,0, 5,0. При достаточно высоких титрах в РМА с гомологичной

культурой (титр не ниже 4х108) животных тотально обескровли

вали, а полученные иммунные сыворотки ампулировали.

В работе использовано 36 положительных лептоспирозных

сывороток с известным титром группоспецифических антител, 13

сывороток больных сифилисом (позитивные в реакции Вассермана),

278

Научная электронная библиотека ЦНСХБ