207 / 604
дировали в минимальном объеме ТЕ-буфера (0,01 М трис-НС
1
,
pH 7,4, 0,001 М ЭДТА) и анализировали методом электронной
микроскопии на микроскопе JEM-100 (JEOL, Япония) при нега
тивном контрастировании
2
%-ной фосфорно-вольфрамовой ки
слотой и инструментальном увеличении 40000, при этом физи
ческий титр составил
8
,0-9,0 1g / см3, также методом электрофо
реза в ГТААГ в восстанавливающих условиях, показавшим удовлет
ворительную чистоту препарата. Очищенный материал аликвоти-
ровали и хранили до использования в нативном виде при минус
60°С.
Иммунизацию кроликов проводили по схеме: 1 день - по
2 0 0
мкг белка с полным адьювантом Фрейнда подкожно в поду
шечки лап; 7 день - 400 мкг белка внутривенно; 20 день - 400
мкг белка с неполным адьювантом Фрейнда внутримышечно и
подкожно; 31 день - 600 мкг белка внутримышечно.
Через 21 день после последнего введения у кроликов отби
рали кровь на сыворотку из краевой наружной вены уха.
Активность полученной сыворотки в непрямом варианте ТФ
ИФА составила 1:12800.
Иммуноглобулины из сыворотки осаждали раствором суль
фата аммония при 30% насыщении (pH 7,2) с последующим вы
делением Ig G методом хроматографии на колонке с ультрагелем
АсА 34. Концентрирование очищенного иммуноглобулина прово
дили высаливанием сульфатом аммония с последющим диализом
против забуференного физиологического раствора pH 7,3. Кон
центрация lg G по белку составила 37 мг/см3. Активность полу
ченного Ig G со специфическим антигеном вируса ЧМЖ соста
вила в РДП 1:8, непрямом варианте ТФ ИФА 1:16000, с низким
уровнем фоновых значений с нормальным культуральным анти
геном. Пероксидазный коньюгат на основе данного иммуногло
булина, полученный по методу Nakane Р., Kawaoi А. (1974),
имел активность в ТФ ИФА 1:400 и ГХ ИФА 1:200.
Таким образом, гипериммунизация кроликов очищенным
культуральным вирусом по данной схеме позволяет получить ак
тивные иммуноглобулины, пригодные для использования в диагно
стической практике.
203
Научная электронная библиотека ЦНСХБ