ЭлБиб

культивировали при 37°С. Через 24-48-72 часа после зараже

ния культуральную среду сливали. Клеточный монослой промы

вали забуференным физиологическим раствором (ЗФР) pH 7,3, и

механически снимали со стекла. Полученную суспензию инфи

цированных клеток осаждали центрифугированием прС. Через

24-48-72 часа после заражения культуральную среду сливали.

Клеточный монослой промывали забуференным физиологическим

раствором (ЗФР) pH 7,3, и механически снимали со стекла. По

лученную суспензию инфицированных клеток осаждали центри

фугированием прС. Через 24-48-72 часа после заражения куль

туральную среду сливали. Клеточный монослой промывали за

буференным физиологическим раствором (ЗФР) pH 7,3, и меха

нически снимали со стекла. Полученную суспензию инфициро

ванных клеток осаждали центрифугированием при

2 0 0 0

g 15 ми

нут (4 °С). Осадок клеток из расчета 5-6 ' 107 ресуспендировали

в 0,5 см

бидистиллированной воды и вносили 0,5 см3 ТЕ-

буфера pH 7,3 (0,01 М трис-HCl, PH 7,4, 0,001 М ЭДТА) с 0,2

мМ MSF. Полученную клеточную суспензию разрушали в гомо

генизаторе Даунса и осветляли центрифугированием при 1000 g

15 минут (4 С). К надосадочной жидкости добавляли тритон Х-100

до конечной концентрации

% и осторожно ресуспендировали.

Очистку нуклеокапсида вируса проводили из цитоплазмати

ческого клеточного экстракта упьтрацентрифугированием при

120000 g 3 часа (4 °С) в ступенчатом градиенте сахарозы в ТЕ-

буфере. Опалесцирующие слои отбирали, освобождали от саха

розы переосаждением ультрацентрифугированием при

1 2 0 0 0 0

3 часа. Осадок ресуспендировали в ТЕ-буфере и анализировали

методом электронной микроскопии с контрастированием уранил-

ацетатом на микроскопе JEM-100 (JEOL, Япония) при инстру

ментальном увеличении 40000. Нуклеокапсиды имели структуру,

характерную для парамиксовирусов, спиральный тип симметрии

и представляли собой по морфологическим признакам нитевид

ные образования с центральным каналом и регулярной перио

дичностью витков спирали. Наиболее высокий выход нуклеокап-

сидов был получен из цитоплазматической фракции через 72 ча

са после инфицирования.

Таким образом, данная методика выделения нуклеокапсида

вируса ЧМЖ является малоэтапной, методически простой и по

зволяет получить очищенный материал в препаративных количе

ствах с хорошей степенью сохранности.

201

Научная электронная библ отека ЦНСХБ