ЭлБиб

клеточного прионного белка (РгРС) только пространственной

структурой. Поскольку первичные структуры РгРС и PrPBSE оди

наковы и, следовательно, PrPBSE не является для организма жи

вотного чужеродным антигеном, иммунный ответ к нему не разви

вается. В ряде работ показано, что антитела для иммунологиче

ских методов диагностики ГЭ КРС можно получить на синтетиче

ские пептидные антигены - фрагменты PrPBSE, конъюгированные

с какой-либо макромолекулой. В настоящее время этому направ

лению в разработке средств диагностики прионных инфекций уде

ляется большое внимание.

Во ВНИИ защиты животных совместно с Институтом биоорга-

нической химии РАН (Москва) выполнены исследования, направ

ленные на получение компонентов для иммуногистохимического ме

тода выявления PrPBSE.

С этой целью был проведен компьютерный поиск антигенных

детерминантов прионного белка КРС и выбраны участки амино

кислотной последовательности, характеризующиеся высокой гид-

рофильностью, поверхностным расположением, высоким коэффи

циентом амфипатичности, склонные к образованию устойчивых -

спиральных структур. На основе проведенного анализа для хими

ческого синтеза были выбраны следующие участки аминокислот

ной последовательности РгР: 17-36, 25-36, 106-123, 106-134,

172-202, 181-200, 186-202, 214-233, 214-240 и 224-240. Оваль

бумин и гемоцианин фиссурелии (KLH) были получены карбодии-

мидным методом. Свободные пептиды, или конъюгаты были ис

пользованы для

- или 3-кратной иммунизации кроликов, в резуль

тате которой получены 103 антисыворотки. Первичную оценку ак

тивности сывороток проводили путем определения антипептидных

антител в ИФА. Из 103 антисывороток 44 показали активность

и выше относительно гомологичного пептида.

Сыворотки с высокой антипептидной активностью использо

вали для оценки активности и специфичности при иммуногисто-

химическом окрашивании срезов ткани мозга, полученных от боль

ных ГЭ животных. В качестве негативного контроля использовали

аналогично приготовленные срезы ткани мозга здорового КРС.

Для проведения иммуногистохимического анализа брали те

же фрагменты продолговатого мозга КРС, выдержанные в фор

малине и залитые парафином, что и для гистологического мето

да. Срезы ткани отмывали от парафина, обрабатывали протеина-

зой, инкубировали с антипептидной РгРВВЕ-специфичной сыво

роткой, антивидовыми биотинилированными антителами, конъю

188

Научная электронная библиотека ЦНСХБ