ЭлБиб

К Л Е Т О Ч Н Ы Е КУЛ ЬТУ РЫ КАК ОСНОВА ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ УСТОЙЧИВЫХ к

А БИОТИЧЕСКИМ И БИОТИЧЕСКИМ ФАКТОРАМ

ПОДХОДЫККЛОНИРОВАНИЮУНИКАЛЬНЫХГЕНОВ,

ВОВЛЕЧЕННЫХВРЕАКЦИЮРАСТЕНИЯНАСТРЕСС

ВакуленкоИ.О., Головко А.О., РатушнякЯ.И., Рудас В.А., Сытник К.И.,

КучукН.В., АбулМандал*, Тапио Палва **

Институт клеточной биологии и генной инженерии АНУкраины, 252143, Киев

143, ул. Заболотного, 148.E-Mail: k

uchuk@iicb.kiev.ua

*Шведский университет сельскохозяйственных наук, Швеция.

**Хельсинскийуниверситет, Финляндия

Целью этой работы является идентификация и клонирование

уникальных генов, вовлеченных в реакцию растения на холодовой и

оксидативны й стресс. Для создания коллекции растений трансформантов

использовался метод инсерционного мутагенеза, основанный на

способности

Agrobacterium tumerfasiens

переносить сегменты ДНК (Т-

ДНК) в растительные клетки, где они интегрируют в ядерные хромосомы.

В экспериментах использовались 2 конструкции: рМНА2 и рНТТ654/

PGV2260. Первая содержала структурную часть репортерного гена GUS

у правого граничного повтора Т-ДНК и pnos-nptll-nosA ген для селекции

тр а н сф о р м а н то в . Во второй , в ка че с тве р епор терно го гена,

использовался ген GFP. Предполагается, что после генетической

трансформации структурная часть репоргерного гена будет считываться

под контролем растительной геномной последовательности, обладающей

регуляторной активностью. В качестве объекта трансформации был

выбран

Arabidopsis thaliana

экотипа С24. Растения трансформанты

второго поколения были обработаны холодом или паракватом-

гербицидом, вызывающим оксидативный стрессу растений, после чего

они исследовалсь на GUS-GFP активность. В результате было получено

644 линии трансформантов с использованием рМНА2 и 100 линий с

pHTT654/pGV2260. Из 644 линий было отобрано 220 линий, второе

поколение которых было устойчиво к канамицину. Было протестированно

113 линий. В двух линиях GUS активность возникла после обработки

растений паракватом, а у растений еще одной линии обработка холодом

вызывала появление GUS активности. Полученные трансгенные линии

б у д у т и с п о л ь зо в а ны д л я кл о н и р о в а н и я р е гу л я т о р ны х

последовательностей и генов, индуцируемых внешним воздействием.

3 6 0

Научн я электронная библиотека ЦНСХБ