ЭлБиб

234

Для оценки образцов люцерны на солеустойчивость про-

ростки культивировали в течение 28 дней в стерильных усло-

виях на агаризованной питательной среде Гамборга В5, содер-

жащей 0,17М NaCl по Мезенцеву [6]. Параллельно, в кон-

трольном варианте, растения выращивались на той же среде,

но без добавления соли. Степень и достоверность влияния со-

левого стресса на растения разных образцов определялись

с помощью двухфакторного дисперсионного анализа (Factorial

ANOVA), позволяющего оценить влияние на зависимую пере-

менную двух факторов: солевого стресса и принадлежности

к определенному таксону/образцу с использованием компью-

терного обеспечения Statistica 5.0.

Для молекулярно-генетического анализа геномную ДНК

выделяли из лиофилизированных растений из CTAB-методом

по Bousquet et al. [7]. Для амплификации фрагментов гена Srlk

использовали геноспецифичные праймеры, сконструированные

с помощью программного обеспечения Primer3Plus. ПЦР-

реакцию проводили в термоциклере (GeneAmp PCR System

9700, Applied Biosystems). Реакционная смесь объемом 20 мкл

содержала 1 % ПЦР-буфера с 1,5 ммоль MgCl2, 200 мкмоль

каждого dNTPs, 5пмоль каждого из праймеров одну единицу

Taq ДНК-полимеразы и 30–60 нг исследуемой ДНК. ПЦР-

реакцию проводили при следующем режиме: 2 мин 94 °С,

40 циклов (30 с 94 °С, 30 с 58 °С и 1 мин 72 °С), заключитель-

ный этап — 5 мин 72 °С перед охлаждением пробы до 4 °С.

Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 1,5%-

ном агарозном геле в 1хТВЕ-буфере, окрашивали бромистым

этидием и фотодокументировали. Анализ нуклеотидных по-

следовательностей, выявление SNP, осуществляли с помощью

пакета Seqman программного обеспечения DNASTAR.

Результаты и обсуждение.

Оценка образцов на солеустойчивость

Сорта культурной люцерны (

Мedicago sativa

) являются

тетраплоидами (2n = 32). Для эксперимента были подобраны

образцы, предположительно контрастные по показателям со-

леустойчивости. Так, культивируемая люцерна сорта Тибет-

ская к-25782 выращивалась на засоленном участке Приараль-

Элек

ронная Научная СельскоХозяйственная Библи тека