NED373392NED

218 Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Том X единяют и разводят питательной средой из расчета, чтобы в 1 см 3 содержалось 10000 ФОЕ. Для первого пассажа (MS) зара- жают не менее 2 роллерных бутылей объемом по 3 дм 3 . Бутыли с инфицированной ВБМ культурой клеток КФ по- мещают в термальные комнаты на 3–5 сут. Каждые сутки про- водят визуальный контроль состояния монослоя. Сбор инфицированных клеток проводят, когда типичные фокусные поражения на монослое составляют 30–50 %. Затем из бутылей удаляют поддерживающую среду и вносят подогретый до температуры 36±1 ºС 0,25 % раствор трипсина в объеме 50–70 см 3 на бутыль, который покачиванием распределяют по всей по- верхности сосуда. Сосуды с раствором трипсина переносят в термальную комнату, помещают на роллерный аппарат со скоро- стью вращения 18–20 об/ч. Через 7–10 мин монослой стряхивают механическим путем и инфицированную клеточную суспензию сливают во флакон. В собранную суспензию добавляют 2 % от объема сыворотку КРС для нейтрализации действия трипсина на клетки. Инфицированную клеточную суспензию центрифугиру- ют при 1000 об/мин, затем надосадок удаляют. Инфицированный клеточный осадок ресуспендируют 40–50 см 3 питательной среды с добавлением 10–20 % сыворотки КРС . Концентрация инфицированных клеток в матриксной рас- плодке (MS) производственных штаммов ВБМ должна быть не менее 4±1×10 6 кл./см 3 . Перед расфасовкой матриксной расплодки ВБМ в ампулы, суспензию инфицированных клеток переносят в плоскодонную колбу, в которую помещают магнит и добавляют к ней 10 % диметилсульфоксида (ДМСО) из бюретки при постоян- ном перемешивании суспензии. После этого колбу снабжают си- фоном или полуавтоматическим шприцем. Разливают суспензию по маркированным ампулам по 1 см 3 , при постоянном перемеши- вании. Затем штативы с ампулами ставят на кювет со льдом и за- паивают в пламени газовой горелки. Объем матриксной расплодки для каждого штамма ВБМ должен составлять не менее 20 см 3 . Матриксную расплодку ВБМ (MS) освежают один раз в 5 лет. Приготовление рабочего посевного материала ВБМ (Working seed). Ампулы с матриксными штаммами вируса бо- лезни Марека (MS) достают из жидкого азота и немедленно по- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека