NED373392NED

Вопросы биотехнологии 219 мещают в воду с температурой 27±1 ºС до полного разморажи- вания. Затем ампулы обрабатывают 3 % раствором перекиси водорода, фламбируют и вскрывают. Для приготовления рабочего посевного материала (WS), в сосуды с 48-часовой культурой клеток КФ вносят вируссодер- жащий материал (MS) штаммов ВБМ из ампул. Количество ам- пул с вирусом, используемых для заражения, определяют исхо- дя из титра матриксной расплодки (MS) штаммов ВБМ. Содер- жимое ампул объединяют и разводят питательной средой из расчета, чтобы в 1 см 3 содержалось: 10 000 ФОЕ. Для получения рабочей расплодки (WS) штаммов ВБМ, вирусный материал вносят на монослой из расчета 1:5–1:10, т.е. 5–10 бутылей куль- тивируют в течение 48–72 ч. Сбор вируса БМ проводят, когда ЦПД обнаруживают на 50–70 % площади монослоя. При этом образуются бляшки, состоящие из поликариоцитов в виде круп- ных многоядерных клеток, которые можно легко увидеть под микроскопом. Съем инфицированных клеток КФ проводят так же, как описано выше. Концентрация инфицированных клеток рабочей расплодки штаммов (WS) ВБМ должна быть не менее 6±1×10 6 кл./см 3 . После подсчета клеток в камере Горяева вирус- содержащую суспензию клеток объединяют и вносят поддер- живающую среду с 20 % сыворотки крови КРС. Дальнейшие действия перед расфасовкой рабочей расплод- ки в ампулы проводят так же, как описано выше в разделе при- готовления главного посевного материала. Объем рабочей рас- плодки производственных штаммов ВБМ, рассчитывают исходя из планируемого количества выпускаемой продукции на 1 год. Замораживание инфицированных клеток (MS и WS) прово- дят, адаптированным к условиям данного предприятия, методом постепенного понижения температуры по следующей схеме: охлаждение при 4 ºС в течение 2 ч, включая время запайки ам- пул, далее 10–12 ч – при температуре минус 70 ºС. Затем ампу- лы немедленно погружают в жидкий азот, помещают в отдель- ный сосуд Дьюара и отдельный контейнер хранилище для био- продуктов (ХБ). Сосуд Дьюара и контейнер ХБ снабжают этикеткой, на ко- торой указывают наименование матриксной и рабочей расплод- ки (штамм, дату изготовления и количество ампул) [2]. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека