NED373392NED

126 Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Том X Суспензию АМС до использования хранили при темпера- туре 4 о С не более двух суток. В день постановки реакции сус- пензию макрофагов с посевной концентрацией (2–4 млн/см 3 ) вносили в культуральные матрасы, объемом 25 см 3 . Матрасы с суспензией помещали на 2 ч в термостат (+37 о С). После 2 ч ин- кубации макрофаги прикреплялись ко дну матраса и образовы- вали ровный монослой клеток, который перед внесением ток- синсодержащей суспензии промывали солевым раствором Хен- кса с рН 7,2–7,4. Определение титра цитотоксина. Разведение фильтратов бульонных культур A. pleuropneumoniae готовили на среде Игла с глютамином (Sigma, США) без сыворотки и антибиотиков. Каждую дозу токсина испытывали на четырех матрасах с ров- ным монослоем АМС. Для характеристики зависимости между эффектом и дозой токсина использовали величину ЦТД 50 – дозу токсина в (мл), вызывающую гибель 50 % клеток в монослое через 1, 3 и 6 ч культивирования. Цитотоксический эффект (ЦТЭ) оценивали по проценту погибших клеток в монослое. Одновременно ставили контроль макрофагов, исключающий возможность естественной гибели клеток. Для этого в матрасы с монослоем добавляли равный объем физиологического раство- ра и инкубировали в течение 6 ч при температуре 37±0,5 о С. Результаты и обсуждение Зоны гемолиза вокруг лунок с КФ штамма «Г-1» начинали формироваться уже через 1,5–2,0 ч инкубирования, тогда как с фильтратом штамма «Ш-1» только через 7,0–8,0 ч. При этом максимальный размер зоны гемолиза у КФ штамма «Г-1» до- стигал 20 мм, независимо от вида используемых в составе сре- ды, эритроцитов. Зоны гемолиза у КФ штамма «Ш-1», на средах с эритроцитами барана и кролика, были различны. Так, макси- мальный размер зоны гемолиза на среде с эритроцитами барана не превышал 10 мм, а на среде с эритроцитами кролика дости- гал 15 мм (рис. 1). Данное различие, по-видимому, связано с особенностями механизмов взаимодействия разных гемолизинов с мембранами эритроцитов барана и кролика. Так, задержка лизиса эритроци- тов кролика КФ штамма «Ш-1» обусловлена действием “слабо- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека