NED373392NED

Болезни сельскохозяйственных животных 125 в холодильнике 10 мин, центрифугировали при 1500 об/мин и колориметрировали на ФЭК в кюветах (10 мм) с зеленым све- тофильтром против воды. Оптическая плотность лизата при длине волны 541 мкм составляла 1,08. Расчет количества гемолитических единиц (ГЕ) токсинсо- держащего супернатанта бактериальной культуры в 1 мл прово- дили следующим образом. После титрования исследуемые про- бы, инкубировали в течение 45 мин при температуре 37°С и да- лее выдерживали в течение 10 мин в холодильнике при 4°С. За- тем пробы центрифугировали и сравнивали с контрольной про- биркой, соответствующей 100 % гемолиза или 1 ГЕ. Получение первичной культуры альвеолярных макрофагов свиней. Для получения первичной культуры АМС использовали клинически здоровых поросят 4–10-недельного возраста из хо- зяйств, благополучных по инфекционным болезням свиней. Животное обескровливали, не допуская попадания крови в тра- хею, затем отпрепарировали легкие и помещали их в стериль- ный сосуд с фосфатно-буферным раствором с рН 7,2 (121 mM NaCl, 10 mM Na 2 HPO 4 , 3,2 mM K 2 HPO 4 ), содержащим гентами- цин в количестве 0,8 мг/см 3 . АМС получали путем вымывания их из легких средой Игла, с добавлением рабочей концентрации антибиотиков (25 мкг/см 3 канамицина, 0,0025 мг/см 3 амфотери- цина-В, нистатина 0,04 мг/см 3 ). После трехкратного центрифу- гирования при 1000 об/мин в течение 10 мин и ресуспендирова- ния, содержание АМС доводили до 2–4×10 6 кл/см 3 в питатель- ной среде Игла с добавлением 10 % фетальной сыворотки круп- ного рогатого скота и содержанием 25 мкг/см 3 канамицина, 0,0025 мг/см 3 амфотерицина-В и 0,04 мг/см 3 нистатина. Концентрацию вымытых АМС определяли путем подсчета их количества в камере Горяева. Для расчета концентрации кле- ток в 1 см 3 использовали формулу: Х= а×1000×n/0,9 , где а – среднее число АМС в полученной суспензии; 1000 – число мм 3 в 1 см 3 ; n – степень разведения суспензии; 0,9 – объем камеры Горяева в мм 3 . Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека