NED373390NED

180 Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных Из сосудов с культурой клеток КФ сливали ростовую среду, монослой отмывали солевым раствором Хенкса и вносили вирус с множественностью инфицирования (М) 0,3-0,5 ТЦД 50 /кл. Через 1 ч контакта вируса с клетками заливали поддерживающую среду в матрасы по 150 см 3 , в роллерные сосу- ды – по 300 см 3 , и культивировали вирус 72 ч при температуре 37,5±0,5ºС. Инфицированную и контрольную культуры клеток ежедневно про- сматривали под микроскопом на наличие характерных морфологических изменений клеток (ЦПД). В момент наивысшей дегенерации клеток моно- слоя (70-80%) на 72 ч проводили однократное замораживание-оттаивание вируссодержащей культуральной жидкости и исследовали ее на стериль- ность, инфекционную активность вируса. Инфекционную активность МПВ птиц штамм «PV03-B» определяли титрованием в суточной культуре клеток КФ по ЦПД. За титр вируса счи- тали наивысшее его разведение, вызывающее четкое ЦПД в 50% культуры клеток КФ. Титр вируса выражали в lg ТЦД 50 /см 3 и рассчитывали по мето- ду Кербера в модификации Ашмарина. Стерильность вирусного сырья определяли в соответствии с ГОСТ 28085-89. Контроль культуры клеток КФ и сыворотки на контами- нацию микоплазмами проводили в среде Кагана. С целью повышения антигенной активности МПВ птиц штамм «PV03-B» были сформированы четыре группы роллерных сосудов (по 6 шт.) с культурой клеток КФ. В роллерные сосуды 1-й группы после контакта вируса с клетками вносили по 100 см 3 поддерживающей среды. В роллерные сосуды 2-й группы на 48-часовой монослой клеток вно- сили одновременно с поддерживающей средой вирус и «свежие» или хра- нившиеся клетки КФ в концентрации 500 тыс/см 3 . В роллерные сосуды 3-й группы после контакта вируса с клетками с поддерживающей средой вносили «свежие» или хранившиеся клетки КФ в концентрации 500 тыс/см 3 . В роллерные сосуды 4-й группы через 24 ч культивирования кле- ток КФ вносили «свежие» или хранившиеся клетки КФ в концентрации 500 тыс/см 3 . Через 48 ч после внесения клеток монослой отмывали со- левым раствором Хенкса и инфицировали вирусом. Через 1 ч контакта вируса с клетками в сосуды вносили по 300 см 3 поддерживающей среды и культивировали вирус в течение 72 ч. При отработке способов культивирования вируса во 2, 3 и 4 группах возникла необходимость в проведении новой трипсинизации или исполь- зовании хранящихся клеток. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека