NED373390NED

Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных 179 чувствительных клеточных систем (1, 2, 3, 5, 9) и эффективных способов культивирования вирусов (7, 10, 12). Целью данной работы являлось сравнение способов выращивания МПВ птиц штамм «PV03-B» с целью дальнейшего его использования для изготовления вакцин и диагностических наборов. Материалы и методы Вирус. МПВ птиц штамм «PV03-B» с инфекционной активностью 7,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Культура клеток. Культивирование МПВ птиц и определение его инфекционной активности проводили в первично трипсинизированой культуре клеток куриных фибробластов (КФ) СПФ-эмбрионов кур фирм Lohmann (Германия), Hy-Vac (США). Питательные среды и растворы. В качестве ростовой среды для культу- ры клеток КФ использовали полусинтетическую монослойную питательную среду ПСП с добавлением 10% сыворотки крови КРС, pH среды 7,0-7,2. В качестве поддерживающей среды для вируса использовали пита- тельную среду ПСП с 2% инактивированной при 58ºС в течение 20 мин сыворотки крови КРС, pH среды 7,3-7,5. Монослой культуры клеток КФ отмывали солевым раствором Хенкса, рН 7,1-7,2. Корректировку pH среды проводили 7,5% раствором бикарбоната натрия. При получении суспензии клеток из эмбрионов кур для разрыхления межклеточных связей и отделения клеток во время трипсинизации ис- пользовали диспергирующий раствор (0,25% раствор трипсина), pH 7,5. Для предотвращения бактериального пророста сред и раствора Хенк- са добавляли антибиотики в общепринятой дозировке. Сосуды и роллерная установка. Выращивание культуры клеток КФ и МПВ птиц проводили в плоских 1,5 дм 3 матрасах и роллерных бутылях емкостью 3 дм 3 . Роллерные сосуды помещали на роллерную установку промышлен- ного типа. Скорость вращения бутылей для культуры клеток КФ составля- ла 4-6 об/час, для вируса – 10-12 об/час. Первичную монослойную культуру клеток КФ готовили по общепри- нятой методике, используя посевную концентрацию клеток для матрасов 250-300 тыс/см 3 , для роллерных сосудов – 600-800 тыс/см 3 . Культуру клеток КФ выращивали в течение 2-3 сут. при температуре 37,5±0,5ºС до формиро- вания сплошного плотного монослоя без признаков дегенерации клеток. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека