NED364051NED

256 мифических олигонуклеотидных праймеров в маточном растворе опре­ деляли спектрометрическим методом. При выделении ДНК из бактериальной культуры клетки осаждали в бляшку центрифугированием в течение 1-2 мин. при 5000-7000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли, 50 мкл культуры добавляли к 300 мкл модифицированного раствора фенола, перемешивали и выдержи­ вали при +95°С в течение 5 минут. Затем проводили экстракцию хлоро­ формом. Осаждение ДНК из водной фазы осуществляли этанолом, за­ тем высушивали и растворяли в 30-50 мкл автоклавированной биди- стиллированной воды. Полимеразную цепную реакцию проводили в объеме 25 мкл, ис­ пользуя 10Х стандартный буфер pH 8,8; соответствующие праймеры; 2,5 мМ dNTP, 0,5 е.а. Taq-ДНК полимеразы; 2 мкл пробы ДНК. Программа амплификации состояла из 42 циклов, в том числе по одному циклу про­ гревание при 95°С и досинтез при 72°С. Отжиг праймеров проходил при 60°С. Результаты исследований по определению специфичности реак­ ции ПЦР с праймерами Lbul4F- Lbul5R, Lacld1F-Lacid2RnStt1F-Stt2R Н аименование культуры П Ц Р с праймерами Lbul4F- Lbul5R L a c id lF - Lacid 2 R Stt1F- Stt2R Staphylococcus albus — — — Staphylococcus aureus — — — Streptococcus epiderm itis — — — Streptococcus pyogenes — — — Escherlhia coli — — — Lactococcu s lactis subsp. lactis C 9182 — — — Lactococcu s lactis subsp. crem oris 3M -5 — — — Lactobac. delbrueckii subsp. bulgaricus 630 + — — Lactobac. delbr. subsp. bulgaricus 37/402И + — — Lactobac. delbr. subsp. bulgaricus 317/402B + — — Lactobac. acid op hilus La 5 — + — Lactobac. acid op hilus L a d d 2/5 изолят — + — Lactobac. a d d o p h ilu s L a d d 3/5 изолят — + — Streptococcus term ophilus 28-2 — — + Streptococcus therm ophilus 124* — — + Streptococcus therm ophilus 1254 — — + Д истиллированная вода — — — Продукты ПЦР визуализировали методом электрофореза в трис- боратном буфере с бромистым этидием. Гель просматривали на тран­ силлюминаторе с длиной волны 254 нм. Результат ПЦР считали поло­ жительным, если продукт ПЦР соответствовал размеру фрагмента ДНК, синтезированного праймерами Lbul4F и Lbul5R для L. delbmeckii subsp.