ЭлБиб

в ФЕ на 1 мг белка. Количество общего белка определяли методом Лоури. Для

исследования каталитических свойств хлоропластной НАДФ-ИДГ был

использован частично очищенный ферментный препарат из

Spirodela polyrhiza

Получение ферментного препарата осуществляли с помощью дифференциального

центрифугирования растительного экстракта* гель-фильтрации через сефадекс G-

25 ("Pharmacia1', Швеция), ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-Toyopearl

("Toyosoda", Япония). Все операции проводились в холодной камере при 0...4°С.

Полученные данные обрабатывали с помощью стандартных статистических

методов.

Результаты и их обсуждение

После 32-кратной очистки был получен ферментный препарат

хлоропластной изоформы НАДФ-ИДГ с удельной активностью 0,92 ФЕ/мг белка.

Проведённые исследования показали, что в процессе регуляции активности

НАДФ-ИДГ могут принимать участие некоторые органические кислоты -

интермедиаты цикла Кребса. 2-оксоглутарат оказывает значительный

ингибирующий эффект, конкурентный по отношению к изоцитрату (К;=0,03мМ).

Очевидно, имеет место регуляция активности по типу обратной связи,

обеспечивающая ее координированность с интенсивностью утилизации

2-оксоглутарата в ходе биосинтеза аминокислот. Цитрат оказывает активирующее

действие на функционирование фермента, при этом наибольший, эффект

наблюдается при концентрациях метаболита 0,5-1 мМ. Цис-аконитат при низких

концентрациях до 0,1 мМ активирует НАДФ-ИДГ, а при концентрациях выше 0,5

мМ оказывает слабое ингибирующее действие. Транс-акойитат является слабым

активатором при концентрациях до 0,5мМ; при более высоких концентрациях

..активность становится ниже контрольного уровня. Установлено, что сукцинат

является ингибитором НАДФ-ИДГ, Изучение влияния некоторых аминокислот на

активность НАДФ-ИДГ показало, что глутамин при низких концентрациях до

0,1мМ вызывает активирующий эффект, а при более высоких концентрациях

имеет место снижение активирующего действия. При концентрациях выше 1мМ

401

Электронная Научная СельскоХозяй твенная Библиотека