NED360717NED

По мнению ряда исследователей [5; 6], основными показателями, характеризующими надежность маркера и его пригодность для успеш­ ного решения поставленных задач, являются кодоминантный характер наследования, возможность выявления высокого уровня полиморфизма, оптимальная частота встречаемости в геноме по хромосомам, селектив­ но нейтральное поведение и высокая воспроизводимость результатов, т. е. возможность стандартизации метода и осуществления обмена дан­ ными между лабораториями. На сегодняшний день не существует иде­ альных молекулярных маркеров, которые полностью бы соответствова­ ли перечисленным требованиям. Для каждой методики характерны оп­ ределенные преимущества и недостатки, что и обусловливает примене­ ние их в соответствии с целью исследований и особенностями генетиче­ ской структуры исследуемого генома [7; 8; 9]. Одна из первых методик на основе ПЦР получила название RAPD-анализ — полиморфизм рандомно амплифицированных фраг­ ментов ДНК [10]. В отличие от классической полимеразной цепной ре­ акции, в этом случае используется один короткий (до 10 нуклеотидов) праймер произвольной структуры, что позволяет избежать предвари­ тельного клонирования и секвенирования соответствующих фрагментов генома. RAPD-маркеры широко используются в молекулярно­ генетических исследованиях представителей разных родов растений, особенно с низким уровнем полиморфизма, имеющих склонность к са­ моопылению или отличающихся большим размером генома. Этот метод не требует наличия высокоочищенной ДНК, которую практически не­ возможно получить у перекрестноопыляющихся культур, что делает проблему выявления полиморфизма почти неразрешимой. Идеально подходят RAPD-маркеры для анализа растений в тех случаях, когда ис­ следовать геном другими методами длительно и дорого, т. к. для этой техники характерны быстрота и легкость детектирования, потребность крайне малого количества ДНК для анализа (от 10 до 25 иг). Благодаря этим характеристикам, система маркирования на осно­ ве RAPD-праймеров завоевала прочные позиции в исследованиях гено­ мов и в практической селекции, в том числе кормовых культур [11]. Маркеры, полученные этим методом, были использованы для изучения генетического родства между популяциями в люцерне [12] и для ДНК- маркирования хозяйственно ценных признаков и сортовой идентифика­ ции многолетнего райграса [2]. С помощью RAPD-маркеров проведен анализ генетических вариаций в сортах клевера лугового [13]. Однако данной системе маркирования присущи определенные не­ достатки. Так, присутствие в RAPD-спектрах полос со сходной молеку­ лярной массой — не всегда доказательство гомологии. Эти полосы мо­ гут быть образованы несколькими эмигрирующими продуктами ам­ 181