65 / 306
Смесь покрывали 20 мкл вазелинового
масла.
Условия амплификации были следую
щими: начальная денатурация 5 мин при
94°С, 35 циклов: денатурация при 94°С -
45 с, отжиг праймеров - 45 с и элонгация
при 72°С 90с; заключительная элонгация
7 мин при 72°С.
М
СН
С Н С Н С Н С Н С Н С Н С Н
КП-11
Дета
М
61-08
4-08
1015-09
1019-09 935-09
220-07
61-06
1014-09
д41
Рис. 1. Электрофореграмма сортов люпина белого с праймером (AC)gG (В): М - маркер мо
лекулярного веса М27?стрелками обозначены полиморфные фрагменты
J360
JMO
м
с н с н с н с н С н С н с н С н
К П -11
ДЛ-М
м
61-Й*
4-ЙЗ
1Й154» 10190$
«5-М
55Й-Й7
й ]-М
1Й 14-»
В-41
Рис. 2. Электрофореграмма сортов люпина белого с праймером (GA)SYC (J): М - маркер
молекулярного веса М27, горизонтальными стрелками обозначены полиморфные фрагменты
Продукты ПЦР разделяли электрофо
резом в 2% агарозном геле с буфером
ТВЕ в присутствии бромистого этидия и
визуализировали на UV-трансиллюми-
наторе или с использованием системы
GelDocXR (BioRad, Москва) и програм
мы для обработки электрофореграмм
QuantityOne. В качестве маркера молеку
лярной массы использовали М27.
Полиморфными считались фрагмен
ты ДНК, присутствующие на электрофо-
реграммах не всех сортов. Характеристи
кой каждого фрагмента служит длина,
выраженная в парах нуклеотидов (п. н.).
Длину ампликона определяют по прой
денному в геле расстоянию, сравнивая со
стандартом молекулярных весов.
Анализ электрофореграмм позволил
составить генетические формулы, отра
жающие присутствие (1) и отсутствие (0)
обнаруженных полиморфных фрагментов
с различными праймерами, которые обо
значали буквами латинского алфавита.
Длину полиморфного фрагмента указы
вали нижним индексом справа (табл. 1-2).
Использование разных праймеров позво
ляет получить спектры электрофоре
грамм, различающиеся по набору ампли-
конов. На рис. 1 и 2 показаны спектры,
полученные с двумя праймерами с после-
55
-
Научная электронная библиотека ЦНСХБ