ЭлБиб

RAPD-анализ.

Для выделения ДНК использовали 2-3-

недельные проростки, при этом брали 15-25 проростков

каждого образца пшеницы. ДНК для RAPD-анализа выде

ляли микрометодом из лиофилизированного материала.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили в тер

моциклере Perkin Elmer 9600 в течение 45 циклов (94°С —

30 сек., 42°С — 30 сек. и 72°С — 1 мин.). Продукты ПЦР

разделяли электрофорезом в пластинах 2

агрозного геля

в приборе "Sunrise'' фирмы GibcoBRL, используя трис-бо-

ратный буфер. После окрашивания бромистым этидием

гели документировали в системе регистрации изображе

ний UV FA 1100 фирмы AL-C (Япония).

Статистическая обработка результатов RAPD-ана-

лиза.

Обработку RAPD-спектров проводили следующим

образом: сначала каждому компоненту присваивали соот

ветствующий порядковый номер, затем присутствие или

отсутствие компонента кодировали, соответственно, циф

рами 1или 0. В конечную матрицу данных включали толь

ко полиморфные и воспроизводимые в ряде независимых

опытов компоненты. Дальнейшую обработку результатов

проводили тремя разными методами многомерной статис

тики: кластерным анализом (КА), анализом главных ком

понент (ГК) и каноническим дискриминантным анализом

(КДА). Для КА на основе данных RAPD-анализа рассчиты

вали матрицу коэффициентов по Дайсу (Dice, 1945) и об

рабатывали ее методом Варда (Ward, 1963), который учи

тывает дисперсию величин расстояний между кластера

ми. Матрицу коэффициентов по Дайсу вычисляли с помо

щью пакета программ NTSYS 2.0 (Rohlf, 1997), а кластери

зацию образцов, построение фенограммы, а также анализ

ГК и КДА осуществляли с использованием программного

обеспечениия STATISTICA (StatSoft Inc., 1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Около 700 случайных 10- и 12-членных олигонуклео-

тидных праймеров были использованы для первичного

скрининга с восемью образцами пшеницы. В итоге было

отобрано 28 праймеров, пригодных для RAPD-анализа. Каж

дый из праймеров инициировал синтез от 1 до 11 фраг

ментов ДНК размером от 130 до 1000 п.н. В общей слож

ности 128 полиморфных компонентов были включены в

матрицу данных.

563

Научная электронная библиотека ЦНСХБ