ЭлБиб

временного присутствия в патологическом материале ротавиру

сов с разными G-серотипами.

Оптимизация условий ПЦР была выполнена на примере

штамма Nebraska (National Veterinary Service Laboratory, U.S.A.).

В реакции амплификации был получен фрагмент с рассчетной

длиной 920 п.н. Было проведено несколько вариантов реакции

реамплификации с различными парами праймеров (GC2-G6, GC2-

G8, GC2-G10) и смесью праймеров GC2,G6,G8 и G10. Продукты

реакций с парой праймеров GC2-G6 и смесью праймеров GC2,

G6, G8 и G10 ничем не отличались друг от друга и содержали

фрагмент длиной 298 п.н. В других вариантах реакций специфи

ческих фрагментов не было выявлено. По результатам реакции

данный штамм был отнесен к серотипу G6, что соответствует

опубликованным данным. Таким образом, высокая специфич

ность реамплификации позволяет проводить тестирование одной

пробы на все три G-серотипа в одной реакции с участием всех

внутренних праймеров. Чувствительность предложенного метода

составляет 10 инфекционных частиц в 1 мл.

С помощью данной методики был протестирован патологи

ческий материал (фекалии и тонкий кишечник) от телят и

взрослых животных, поступивший из хозяйств Российской Фе

дерации за период 1998-1999 гг. Несмотря на то, что отработка

метода проводилась только на примере штамма Nebraska, имею

щего серотип G6, были успешно выявлены ротаврусы серотипов

G8 и G10, что позволило провести оптимизацию условий реам

плификации и для этих серотипов. Например, в ходе тестирова

ния одной из проб в продуктах амплификации был обнаружен

фрагмент длиной 920 п.н., свидетельствующий о наличии в пат-

материале ротавируса. Однако при проведении реакции реам

плификации со смесью универсального праймера GC2 и серотип-

специфических праймеров G6, G8 и G10 не было обнаружено ни

одного специфического фрагмента соответствующей длины. По

этому были проведены три реакции, в каждой из которых при

сутствовал праймер GC2, и один из трех праймеров G6, G8 или

G10 при различных температурах отжига. В результате, в про

дуктах реакции, проведенной с праймерами GC2-G8 GC2-G8

раймерами _ературах, был обнаружен фрагмент длиной 165 п.н.,

свидетельствующий о наличии у данного ротавируса серотипа

G8, что было в дальнейшем подтверждено секвенированием дан

ного фрагмента кДНК. Аналогичным образом была проведена оп

тимизация условий реакции на примере полевого изолята рота

вируса с серотипом G10. В итоге было определено, что опти

мальными для реакции реамплификации, позволяющей выявлять

и дифференцировать все три G-серотипа ротавируса в одной ре

226

Н учная электронная библиотека ЦНСХБ