ЭлБиб

является вакцинация, успешность которой напрямую зависит от

соответствия серотипов производственных штаммов и полевых

изолятов вируса. Поэтому наряду с выявлением вируса важной

составляющей диагностики ротавирусной инфекции является оп

ределение серотипа выявленного ротавируса. Серотипирование с

помощью традиционных серологических реакций, таких, как, на

пример, реакция вирусной нейтрализации, в том числе с исполь

зованием моноклональных антител, имеет ряд недостатков, в ча

стности, необходимость выделения изолята ротавируса в культу

ре клеток и получение антисывороток, что делает этот процесс

дорогостоящим и очень продолжительным. Перспективным на

правлением диагностики ротавирусной инфекции является при

менение полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая характе

ризуется высокой чувствительностью, специфичностью и быст

ротой выполнения. В представленной работе показана возмож

ность применения ПЦР не только для выявления ротавируса

КРС, но и для дифференциации его основных серотипов.

Наиболее важным в образовании вируснейтрализующих ан

тител в силу своего значительного количественного превосход

ства во внешнем капсиде вириона является белок VP7, который

определяет G-серотип вируса. Основными G-серотипами ротави

русов КРС являются G6, G8 и G10. Сравнительный анализ

опубликованных нуклеотидных последовательностей гена VP7

данных серотипов ротавируса КРС позволил выявить консерва

тивные участки и провести расчет гомологичных данным участ

кам универсальных праймеров, с помощью которых возможно

выявление ротавируса КРС в реакции, обратной транскрипции-

ПЦР (ОТ-ПЦР). Для повышения чувствительности метода были

сконструированы внутренние праймеры для реамплификации.

Праймеры были рассчитаны таким образом, что только один из

них является универсальным для всех серотипов, а парным ему

служит один из трех праймеров, которые специфичны для каж

дого серотипа (G6, G8 и G10) в отдельности. Серотип выявлен

ного ротавируса определяется тем, какой из трех серотипспеци-

фических праймеров принял участие в реакции реамплификации,

а поскольку данные праймеры расположены на различном удале

нии от универсального праймера GC2, реакция может быть вы

полнена одновременно с участием всех внутренних праймеров, а

определить ее специфичность возможно по длине синтезируемо

го фрагмента. Наличие в продуктах реамплификации фрагмента

длиной 298, 165 или 593 п.н. свидетельствует о присутствии в

патологическом материале РНК ротавируса серотипа G6, G8 или

G10 соответственно. Такая система теоретически позволяет вы

являть более одного G-серотипа в одной реакции в случае одно

225

Научная электронная библиот а ЦНСХБ