NED373392NED

Вопросы биотехнологии 239 вые 2 сут. живых клеток к вторичной адгезии и возможность формирования полноценного монослоя. Материалы и методы Первично трипсинизированную культуру СП получали из почек поросят 4–8-недельного возраста с использованием обще- принятых методик получения первичных клеточных культур [1, 2, 4]. В результате нами была проведена работа по изучению ад- гезивной способности отдельных клеток и их агрегаций, морфо- логии первично адгезированных клеток и последующих генера- ций, динамики формирования монослоя, морфологии клеток и монослоя в зависимости от биологического статуса поросят [2, 3]. Для выращивания первичных клеток почек поросенка (СП) нами были использованы питательные среды на основе солевого раствора Эрла с 0,4 % ГЛА фирмы Serva, и фетальная сыворотка КРС фирмы Bioclot. Выращивание клеток проводили в пеницил- линовых флаконах и пластиковых флаконах площадью 25 см². Анализ морфологии клеток и монослоя проводили с помо- щью фазово-контрастного микроскопа Olympus CKX-41. Также осуществлялся подсчёт продуктивности первичных клеток по- сле образования монослоя на 5–10 сут. Результаты и обсуждение В производственных условиях возникает необходимость получения дополнительного количества первичных культур по- сле основного цикла трипсинизации, т.е. через 2–4 сут. после трипсинизации. Для того чтобы не использовать дополнительно органы поросёнка, нами была изучена выживаемость трипсини- зированных клеток при +4 ºС в течение 10 сут. Были получены сопоставимые результаты при культивировании первично три- синизированных клеток после 2-сут. хранения суспензии. В этом случае выживаемость клеток достигала 90 %, и при посеве в культуральные флаконы полноценный монослой формировал- ся на 5–6 сут. На 10 сут. хранения количество живых клеток уменьшилось на 50 %, при посеве 200 тыс. клеток/мл монослой формировался на 7 сут. Выращенные таким образом первичные культуры были пригодны для определения авирулентности по- луфабрикатов вакцин и для титрования вирусов. Электронная Науч ая СельскоХозяйственная Библиотека