NED373392NED

Болезни сельскохозяйственных животных 161 карпа) с использованием среды МЕМ с двойным набором ами- нокислот и витаминов с добавлением 10 % фетальной сыворот- ки КРС и обогащенной среды ПСП. При получении очищенных и концентрированных препаратов антигена VHS с целью гипе- риммунизации животных использовали вирусный материал с активностью не ниже 5,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Полученный вирусный материал концентрировали в 1000 раз с помощью ПЭГ ММ 6000 Д и очищали через 20 % раствор саха- розы и в градиенте плотности хлористого цезия 1,19–1,5 г/см 3 . Гипериммунные сыворотки к вирусу VHS получали на кроликах массой 2,0–3,0 кг и морских свинках массой 0,4– 0,5 кг. Вирусный антиген для иммунизации готовили с полным (ПАФ) и неполным адъювантом Фрейнда (НАФ) в соотношении 1:1. Для иммунизации использовали вирус VHS с титром не ме- нее 8,5–9,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Кроликов иммунизировали по схеме: – 1 введение – подкожно в подушечки лап задних конечно- стей по 0,1 см 3 (антиген+ПАФ) в каждый палец; – 2 введение – через 30–42 суток внутримышечно в бедро задних конечностей по 0,5 см 3 (антиген+НАФ) в каждую; – 3 введение – через 10 суток после второй иммунизации. Морских свинок иммунизировали по той же схеме, но антиген вводили только внутримышечно в дозе 0,5 см 3 эмульсии. Гипериммунные сыворотки крови к вирусу VHS тестирова- ли в непрямом варианте ИФА и РН по стандартным методикам. Активность гипериммунных сывороток крови кролика к вирусу VHS в ИФА составила 1:312500. Полученные сыворотки крови очищали 10 % раствором по- лиэтиленимина. Иммуноглобулины высаливали сернокислым аммонием, конъюгировали с ФИТЦ. Активность ФИТЦ-иммуноглобулина определяли путем использования в реакции иммунофлуоресценции (РИФ) на ин- фицированной референс-штаммом вируса VHS культуре клеток ЕРС различных разведений ФИТЦ-иммуноглобулина: 1:20, 1:40, 1:80, 1:100, 1:140. Постановку и учет РИФ осуществляли по стандартной методике. Специфичность ФИТЦ-иммуноглобулина в рабочем разве- дении определяли в РИФ с использованием отрицательного контроля незараженной культуры клеток и препаратов гетеро- логичных вирусов возбудителей вирусных болезней рыб (вирус Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека