NED373392NED

142 Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Том X помощью ИФА и ПЦР. При пассировании изолята ALV-J SVR807 накопление вируса в целом происходило медленнее. По окончании срока инкубации вируса клетки проморажива- ли, оттаивали, проводили сбор клеточной суспензии, отбирали об- разцы для исследования в ПЦР и ИФА. Вируссодержащий матери- ал хранили при температуре минус 70 ºС. Для дальнейшего пасси- рования в качестве заражающего материала применяли культу- ральную жидкость, полученную в ходе предыдущего пассажа. Инокуляцию культуры клеток проводили по схеме, описанной выше. Результаты выделения ВЛП-J представлены в таблице. Для адаптации изолятов ВЛП-J проводили 2–3 пассажа. Как правило, по истечении указанного количества пассажей значения ИФА и ПЦР в образцах вируссодержащего материала были стабильные. Данный факт является критерием адаптации вируса к культуре клеток. Однако для адаптации изолята SVR807 требовалось провести 6 пассажей. Из приведённых ре- зультатов видно, что значения Ct ПЦР находятся в достаточно большом диапазоне от 13 до 25 циклов. Таблица Результаты культивирования изолятов ВЛП Название изолята Пассаж Результаты ПЦР, Ct Результаты ИФА, пкг/мл* ALV-J SVR807 6 22,9±1,7 (1,5±0,1)·10 4 ALV-J/ CLB-908U 3 25,5±2,7 (4,2±1,5)·10 3 ALV-J VLD-1005 2 13,7±2,4 (5,7±1,9)·10 3 ALV-J CLB-908M 2 22,4±1,2 (2,2±0,2)·10 4 ALV-J RZN-1006 3 18,68±2,1 (1,1±0,3)·10 3 ALV-J KOM1010 3 21±1,37 (4,3±0,2)·10 4 * положительными считаются значения выше 900 пкг/мл. Необходимо отметить, что между значением Сt и концен- трацией вируса в материале имеется обратная зависимость, т.е. чем меньше значение цикла, тем больше содержание вирусной РНК (либо провирусной ДНК) в образцах. Максимальное зна- чение ПЦР в реальном времени было получено в пробах ALV-J VLD-1005. В результате проведения ИФА было показано, что концентрация вирусного протеина р27 в образцах изолятов ва- рьирует в пределах 10 3 –10 4 пкг/мл. Максимальная концентрация вирусного белка была получена для изолята ALV-J KOM1010. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека