NED373392NED

Болезни сельскохозяйственных животных 141 Материалы и методы Вирусы. В работе использовали полевые изоляты ВЛП, вы- явленные в патологическом материале, поступившем в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2008–2010 гг. ПЦР. Для детекции генома ВЛП-J в патологическом мате- риале и культуральных пробах применяли метод ПЦР в режиме реального времени согласно методике, разработанной ранее [4]. Культуры клеток и питательные среды. Культивирование ВЛП-J проводили на первичной культуре клеток ФЭК. Для полу- чения данной культуры клеток использовали 12-суточные эмбри- оны SPF-кур (Lohmann, Германия). Получение культуры клеток ФЭК проводилось по методике [3]. Для получения монослоя культуры клеток ФЭК применяли флаконы ёмкостью 25 см 3 (Corning, США). В качестве ростовой среды применяли смесь сред Лейбовица (Sigma, США) и Маккоя (Sigma, США) в соот- ношении 2:1. Данная смесь содержала 10 % фетальной сыворотки КРС (Bioclot, Бразилия). В качестве поддерживающей среды применяли смесь сред Лейбовица (Sigma, США) и Маккоя (Sigma, США) в соотношении 2:1. Данная смесь содержала 2 % фетальной сыворотки КРС (Bioclot, Бразилия). Культивирование вируса. Культивирование вируса ВЛП-J проводилось по методике [3]. ИФА. С целью тестирования образцов пассажей ВЛП-J на наличие специфического вирусного белка (р27) применяли «Набор для выявления антигена вируса лейкоза птиц (ЛП) им- муноферментным методом (ИФА)» (Synbiotics, США). Результаты и обсуждение В качестве исходного материала для культивирования ви- руса применяли патологический материал, поступивший из птицефабрик Челябинской, Владимирской, Рязанской областей, а также – из республики Коми. При проведении микроскопических исследований измене- ний в клеточном монослое отмечено не было. Наличие вируса и его количество определяли с помощью ПЦР и ИФА. Срок инку- бации вируса, как правило, составлял до 10 суток. Для опреде- ления данного показателя проводили сбор вируссодержащего материала в разные сроки инкубации, образцы тестировали с Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека