NED373392NED

Болезни сельскохозяйственных животных 107 ОП К - – оптическая плотность отрицательной контрольной сыворотки; ОП К + – оптическая плотность положительной контрольной сыворотки. Диагностическую чувствительность и специфичность вы- числяли по формулам, рекомендованным Всемирной организа- цией здравоохранения животных (МЭБ): Д чув = (ИП / ИП + ЛО) × 100 % ; Д спец = (ИО / ИО + ЛП) × 100 % , где ИП – истинно положительный результат; ЛО – ложноотрицательный результат; ИО – истинно отрицательный результат; ЛП – ложноположительный результат. Результаты и обсуждение Ген, кодирующий внешний мембранный белок OmpL1 L. interrogans , амплифицировали методом ПЦР. В реакции исполь- зовали праймеры, содержащие сайты рестрикции Bam HI и Hind III. После обработки соответствующими рестриктазами ампликон клонировали в экспрессирующий плазмидный вектор. В результа- те трансформации рекомбинантной плазмидой компетентных кле- ток E.coli получили клоны, экспрессирующие рекомбинантный белок L. interrogans , содержащий на N-конце шесть остатков ги- стидина. Очистку рекомбинантного белка проводили методом ме- талл-хелатной хроматографии (рис. 1). Из 100 мл культуры E. coli было получено 6 мг очищенного препарата рекомбинантного бел- ка (2 мл раствора белка с концентрацией 3 мг/мл). Антигенную активность белка проверяли в непрямом вари- анте ИФА с контрольными сыворотками свиней, взятыми в раз- ведении 1:20. Рекомбинантный белок разводили от 1:100 (30 мкг/мл) до 1:102400 (0,03 мкг/мл). Зависимость средней оп- тической плотности контрольных сывороток от концентрации рекомбинантного антигена представлена на рис. 2. Максимальное разведение белка, при котором еще прояв- лялась его антигенная активность, составляла 1:102400 (0,03 мкг/мл). Концентрацию белка, равную 0,47 мкг/мл, выбра- ли рабочей в ИФА. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека